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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » FDA染色前需要固定细胞吗
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xyyy

木虫 (正式写手)

[求助] FDA染色前需要固定细胞吗

请教各位生物学大侠们：
我是刚接触细胞实验，最近在学习用FDA染色，然后荧光观察细胞在材料上的生长情况。
第一次就是直接加入染色剂，然后PBS漂洗了几次，直接拿出材料显微观察，可以看到细胞发绿光，但是细胞变圆了，有从材料上脱附的现象（如图）。
于是想是不是染色前需要固定一下，第二次就用多聚甲醛固定了，然后染色，漂洗后观察时却看不到荧光了，更没有细胞，不知道怎么回事。是不是染活细胞的FDA遇到固定后的细胞失去作用了？还是固定剂选的不对呢？
费解！求解！
不甚感激！
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1楼 2011-11-01 09:34:41
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xyyy

木虫 (正式写手)
why就没有人回复呢？难道生物大侠们都不愿意回答我的几乎菜鸟级的问题？还是我没说明白？抑或。。。。
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2楼2011-11-03 21:38:26
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xufalun

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~ 2011-11-04 16:25:14
xyyy(金币+1): 还是谢谢 2011-11-16 16:42:55
fda是在活细胞内，才能被酶分解为可以产生荧光的物质。你加的固定剂把细胞都杀死了，当然没荧光啦，况且细胞不需要固定。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

xyyy
3楼2011-11-03 22:28:05
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xyyy

木虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by xufalun at 2011-11-03 22:28:05:
fda是在活细胞内，才能被酶分解为可以产生荧光的物质。你加的固定剂把细胞都杀死了，当然没荧光啦，况且细胞不需要固定。

那请问为什么没有铺展呢？是圆的细胞，不是那种。。。U know？还有就是有点测试细胞室需要固定的，比如做sem。
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4楼2011-11-05 11:38:52
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达达米happy

新虫 (初入文坛)
应该是不用固定的，不过我不固定用激光共聚焦做出来也不好看。。。
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5楼2012-09-10 13:25:04
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狼250

新虫 (初入文坛)
你好，我刚接触细胞实验，想咨询一下用FDA染色法时，加入FDA染液之后细胞要培养多长时间才可以检测？
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6楼2015-04-21 13:43:07
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