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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 菌饼接种技术
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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 菌饼接种技术

有谁做过用打孔器在平板上打出菌饼，然后接种摇瓶的实验啊？请教详细的过程。我做了几次，老是染菌。怎么能保证操作过程的无菌呢？讲得越细越好。
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1楼 2011-10-31 10:57:30
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

张建荣

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流！ 2011-10-31 18:29:35
菌饼接种的目的是什么？对于菌饼接种来说没什么意义吧，如果真要这样的话，你对打孔器灭菌了吗？你在无菌试验台操作了吗？
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执着
3楼2011-10-31 15:41:49
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newtime007

木虫 (正式写手)

成长的微生物

【答案】应助回帖

★
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-11-01 09:23:23
amq7392(金币+2): 谢谢 2011-11-01 10:18:30
引用回帖:
4楼: Originally posted by amq7392 at 2011-10-31 18:30:57:
谢谢您的回复。
我用菌饼接种当然是有理由的：我做的是真菌，不产孢子，摇瓶培养产菌丝球，没有无菌匀浆的条件，怎么制作一级培养种子液？所以只能用打孔器打菌饼，大概保持接种量一致，不用很精确。我的问题是 ...

学习了。没用打孔器接过种。
    你可以试试用接种铲接种和打孔器接种，对比一下是接种铲引起燃菌还是操作染菌或其他原因。因为染菌往往是多方面的，你需要尽可能排除干扰因素。然后找出适合你的方法，祝你成功！
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上善若水，水善利万物而不争
6楼2011-11-01 08:47:28
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yanjinyuan

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-11-01 09:23:29
amq7392(金币+2): 谢谢 2011-11-01 10:18:42
amq7392(金币+2): 2011-11-01 10:20:05
我们做的打孔器可以不灭菌的，直接在酒精灯上面多烧一下就好了。你可以先用打孔器打了孔，然后再用接种钩接到三角瓶就OK了。
打孔的时候，平板打开的口一直对着酒精灯，三角瓶也是啊
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加油，早点毕业
7楼2011-11-01 09:22:10
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newtime007

木虫 (正式写手)

成长的微生物

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2011-10-31 18:29:30
1.你为什么接种菌饼，用打孔器是为了保证接种均匀吗？可平板上的菌密度谁能保证均匀哪？所以用打孔器在平板上打出菌饼没多大意义。
2.如果你想保证试验的平行性，做一级种子培养液吧，每瓶发酵液中接种相同的量，这样更能保证试验的平行。
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上善若水，水善利万物而不争
2楼2011-10-31 15:34:44
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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by newtime007 at 2011-10-31 15:34:44:
1.你为什么接种菌饼，用打孔器是为了保证接种均匀吗？可平板上的菌密度谁能保证均匀哪？所以用打孔器在平板上打出菌饼没多大意义。
2.如果你想保证试验的平行性，做一级种子培养液吧，每瓶发酵液中接种相同的量， ...

谢谢您的回复。
我用菌饼接种当然是有理由的：我做的是真菌，不产孢子，摇瓶培养产菌丝球，没有无菌匀浆的条件，怎么制作一级培养种子液？所以只能用打孔器打菌饼，大概保持接种量一致，不用很精确。我的问题是，我用菌饼接种摇瓶时老是染菌，请教操作的细节，比如平板和三角瓶怎么个拿法。您回避我的问题了，呵呵
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4楼2011-10-31 18:30:57
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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 张建荣 at 2011-10-31 15:41:49:
菌饼接种的目的是什么？对于菌饼接种来说没什么意义吧，如果真要这样的话，你对打孔器灭菌了吗？你在无菌试验台操作了吗？

我对打孔器灭菌了吗？我在无菌试验台操作了吗？您觉得呢？呵呵
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5楼2011-10-31 18:34:16
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xiaojiancai

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

amq7392(金币+2): 谢谢 2011-11-01 10:19:02
首先要保证平板培养过程中未受污染或者有无受污染的可能；
如果平板很纯，接下来才能进行下一步操作：在无菌操作间严格按照无菌操作要求打孔及接种，这个应该没问题吧？
最后在摇床培养时也得注意转速的控制，还有瓶塞的空气过滤是否能保证无菌，可以用比较大较松散的棉塞或者用4-8层纱布包裹。
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知福福常在，随缘缘自来！
8楼2011-11-01 09:49:10
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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yanjinyuan at 2011-11-01 09:22:10:
我们做的打孔器可以不灭菌的，直接在酒精灯上面多烧一下就好了。你可以先用打孔器打了孔，然后再用接种钩接到三角瓶就OK了。
打孔的时候，平板打开的口一直对着酒精灯，三角瓶也是啊

怎么用手拿才能保证平板和三角瓶口一直对着酒精灯，并且同时还得拿着接种钩接种啊？如果有三只手就好了，一只手拿平板，一只手拿接种钩，一只手拿三角瓶，呵呵。
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9楼2011-11-01 10:23:04
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yanjinyuan

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yanjinyuan at 2011-11-01 09:22:10:
我们做的打孔器可以不灭菌的，直接在酒精灯上面多烧一下就好了。你可以先用打孔器打了孔，然后再用接种钩接到三角瓶就OK了。
打孔的时候，平板打开的口一直对着酒精灯，三角瓶也是啊

先用打孔器打好，但是不要拿出来，打的时候平板口对着酒精灯。然后烧好接种钩，用接种钩接种到三角瓶，同时三角瓶口也要对着酒精灯。因为用打孔器不能烧完全达到灭菌的效果，直接用打孔器很容易污染
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加油，早点毕业
10楼2011-11-01 10:33:15
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