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luozhen2008

木虫 (正式写手)

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[交流] 关于腺病毒包装的问题

最近要包装腺病毒，按照protocol上说转染后7到10天收集细胞，但是我的细胞转染后四天都漂了80%。转染的时候细胞汇合度大概50%左右，24h后更换过培养基，我用的25cm2的培养瓶。加了7ml的培养基。那个有经验的大哥能不能解释下。我是应该提前收细胞，还是等到5天以后，如果等到5天后病毒会不会释放到上清里面去了？

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1楼 2011-10-29 20:34:31

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lexiner82

新虫 (初入文坛)

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★
luozhen2008(金币+1):谢谢参与

是不是脂质体加多了哦不要频繁的看细胞，晃来晃去的容易漂

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2楼2011-11-28 16:29:32

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西山鱼

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★
luozhen2008(金币+1):谢谢参与

多几天没关系，我的经验是感染时间很重要，5-7天是必要的。上清一起纯化就是

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4楼2012-02-18 11:49:34

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威尼斯

铁虫 (初入文坛)

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★
luozhen2008(金币+1):谢谢参与

我感觉你的细胞密度过低，转染后细胞容易死！

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5楼2012-03-10 17:54:12

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CY.Force

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★
luozhen2008(金币+1): 谢谢参与

我觉得等待五天是必须的，如果包装成功，病毒会释放到上清里！

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6楼2013-12-23 16:55:07

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海的蓝色梦想

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★
luozhen2008(金币+1): 谢谢参与

请问您找到转染4后细胞大量漂浮的原因了吗？怎么解决问题的呢？我现在遇到了同样的难题，求助！多谢！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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7楼2015-01-24 00:41:34

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海的蓝色梦想

新虫 (初入文坛)

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金币: 7.3
帖子: 2
在线: 22分钟
虫号: 1960625

万分感激，谢谢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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8楼2015-01-24 00:42:56

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littlecale

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★
luozhen2008(金币+1): 谢谢参与

1.细胞的状态问题（最主要的，293包腺病毒代数最重要，代数高的短时间就容易飘）；
2.降低血清浓度；
3.用低毒性的转染试剂比如汉恒的LipoFiter，我试过还不错
来病毒包装QQ群一起讨论下：AAV 腺病毒慢病毒/转染 390425058

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9楼2015-09-04 10:04:43

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Dorothy_汉恒

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★
luozhen2008(金币+1): 谢谢参与

主要还是细胞状态的问题，考虑换一批细胞包装吧，另外不要频繁看细胞！用低毒的转染试剂（如我们公司研发的LipoFiter）很关键！lipo2000毒性实在太大，普通转染还行，包毒就算了吧。

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10楼2015-09-11 07:47:49

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jora0418

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★
luozhen2008(金币+1): 谢谢参与

哪位有腺病毒包装protocol呢能不能给我邮箱发一份？419749423@qq.com 谢谢各位

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11楼2015-11-14 16:23:06

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clarktao3楼

2011-11-28 16:33 回复

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