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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酵母双杂交用X-gal显色要注意哪些事啊！
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天际雾影

新虫 (小有名气)

[交流] 酵母双杂交用X-gal显色要注意哪些事啊！

有虫友们做个酵母双杂交实验么？用X-gal显色有哪些特别注意啊？我做的结果不稳定，猜测有些细节没有注意到。求助大家，多多交流。
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1楼 2011-10-29 14:53:43
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qian0wei

银虫 (初入文坛)
★
天际雾影(金币+2): 谢谢参与
引用回帖:
4232431楼: Originally posted by SHgenomics at 2011-12-12 10:59:24
具体可以将菌落用转移到滤纸上，然后将滤纸浸没液氮中裂解 然后在用裂解后的菌落进行显色
顺便做个小广告···别别介意
本公司提供酵母双杂交服务，10年酵母双杂交经验，帮多个国内知名实验室做过酵母双杂交技术 ...

您好，我当前也正准备做显色实验，请问下具体操作步骤，是将菌挑在滤纸上，然后将滤纸浸没在液氮中裂解（多少时间？反复浸没？），然后在滤纸上直接加x-gal进行显色？
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7楼2012-07-31 13:19:12
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xinnier

银虫 (小有名气)
★
天际雾影(金币+2):谢谢参与
现在还处在看文献，了解阶段；后面才开始做。大家可以交流讨论( ⊙ o ⊙ )啊！小木上关于这方面的···很少唉！
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2楼2011-11-01 21:18:40
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天际雾影

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xinnier at 2011-11-01 21:18:40:
现在还处在看文献，了解阶段；后面才开始做。大家可以交流讨论( ⊙ o ⊙ )啊！小木上关于这方面的···很少唉！

做酵母的确实好少啊！
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3楼2011-11-02 11:40:57
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l8843802

木虫 (初入文坛)
★
天际雾影(金币+2):谢谢参与
x-gal staining ，x-gal要现配现用并且注意遮光保存。当然z-buffer可以放置久一点。另外就是液氮冰冻菌的时候可以试试反复冻融，这样会使细胞破碎的更加完全一些，便于染色液的渗透。还有就是，y2h验证的蛋白只能是1对1的。任何通过第三方介导的interaction都无法检测到。染色变蓝得时间应该在12h以内，时间长了就有可能是长菌污染。
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4楼2011-12-11 00:22:40
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