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天际雾影

新虫 (小有名气)

应助: 7 (幼儿园)
金币: 32.2
帖子: 129
在线: 24.5小时
虫号: 856359

[交流] 酵母双杂交用X-gal显色要注意哪些事啊！

有虫友们做个酵母双杂交实验么？用X-gal显色有哪些特别注意啊？我做的结果不稳定，猜测有些细节没有注意到。求助大家，多多交流。

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1楼 2011-10-29 14:53:43

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l8843802

木虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2867.8
帖子: 24
在线: 40.5小时
虫号: 1202828

★
天际雾影(金币+2):谢谢参与

x-gal staining ，x-gal要现配现用并且注意遮光保存。当然z-buffer可以放置久一点。另外就是液氮冰冻菌的时候可以试试反复冻融，这样会使细胞破碎的更加完全一些，便于染色液的渗透。还有就是，y2h验证的蛋白只能是1对1的。任何通过第三方介导的interaction都无法检测到。染色变蓝得时间应该在12h以内，时间长了就有可能是长菌污染。