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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白氨基酸序列分析及二、三、四级结构的鉴定
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
3103957楼: Originally posted by txyamy at 2011-10-27 19:53:41
什么公司给推荐下，呵呵 ...

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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
21楼2012-08-28 00:25:40
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★
silicare: 金币+2, 应助指数+1, 谢谢参与 2012-08-31 18:18:18
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
22楼2012-08-28 00:31:13
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落满夏天

银虫 (正式写手)
好的，谢谢兄台。
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星星之火，可以燎原
23楼2012-08-31 16:12:47
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fuding6

木虫 (小有名气)
蛋白样品经酶解后，用MALDI-TOF可以做氨基酸测序（打个二级质谱），并且与蛋白质数据库进行比对。此外能打二级质谱的ESI也可以测氨基酸序列。一般大学的蛋白质组学分析中心都可以做。
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24楼2013-06-08 13:45:12
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
质谱可以用于研究蛋白质的四级结构和蛋白质-蛋白质相互作用，要用MADLI-MS，能够在质谱峰上出现特异性的蛋白质的四级结构和蛋白质-蛋白质相互作用的峰，解离状态或者单个亚基没有此峰。

文献可见：
MIE Vol-402 Biological Mass Spectrometry(2005,)Free,论坛附件上传，下载快。
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5880521
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25楼2013-06-08 17:58:43
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
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26楼2013-06-08 18:00:59
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
鉴定三级结构和四级结构，不要用晶体衍射，很多时候单晶体根就做不出来！
一级结构的测定我就不说了，基于Ediman降解的自动测序仪测序不难，费用也不是很高。当然，可以用串联质谱或者Ladder Sequencing的质谱测序，如果你们真的非常有钱的话而且愿意如此去花费的话。
首先要保证三级结构和四级结构的分子量与标准品一样，可以直接用MS测定四级结构蛋白质的分子量，这比用电泳和层析精确且方便。而后可以使用肽谱分析，以前酶切割走电泳，现在酶切后用质谱测定各个水解片段的相对分子量是否与数据库中的信息吻合。
而后用红外傅里叶变换光谱测定样品的二级结构的种类是否符合标准品，再用对比两者的紫外光谱和荧光光谱，大致可以比较出两者的三级结构是否相同。有条件的话，可以用圆二色光谱比较样品和标准品的典型的二级结构的数量的比例是否形同，需要相应的软件处理圆二色光谱数据。
做完以上工作后，在保证了分子量相同的前提下，最简单的三级结构和四级结构的鉴定方法就是测定蛋白质的功能，如果功能活性很强，那么综合前面的信息蛋白质很可能就是目的蛋白质。
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27楼2013-06-08 18:27:43
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
鉴定三级结构和四级结构还可以用免疫方法，使用标准品的单克隆抗体对于样品进行WB,Pull-down，免疫沉淀之类实验。
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28楼2013-06-08 18:57:45
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遥控器68

金虫 (小有名气)
楼主的纯蛋白是什么意思啊？搞到纯蛋白还用质谱干嘛呢？
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29楼2013-06-09 17:39:41
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
引用回帖:
29楼: Originally posted by 遥控器68 at 2013-06-09 17:39:41
楼主的纯蛋白是什么意思啊？搞到纯蛋白还用质谱干嘛呢？

提纯蛋白质后总要有检验的标准，质谱就是最好的检验手段，不是吗！？
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30楼2013-06-09 17:53:01
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