| 查看: 3630 | 回复: 33 | |||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||
txyamy木虫 (小有名气)
|
[求助]
蛋白氨基酸序列分析及二、三、四级结构的鉴定
|
||||
| RT，本人想分离纯化蛋白，然后对其纯蛋白进行氨基酸序列分析及二、三、四级结构的鉴定， 想请教下高人，这个纯蛋白进行氨基酸序列分析用MADI-TOF质谱仪可以分析吗？还是需要送样，以及主要的测序公司怎么找呢？ 另外蛋白分离纯化过程中，已经变性，接下来的结构还有希望吗？请高人指点。 不胜感激啊！ |
回复此楼» 猜你喜欢
国家基金申请书模板内插入图片不可调整大小?
已经有9人回复
-
退学或坚持读
已经有20人回复
-
免疫学博士有名额，速联系
已经有14人回复
-
面上基金申报没有其他的参与者成吗
已经有4人回复
-
多组分精馏求助
已经有6人回复
-
国家级人才课题组招收2026年入学博士
已经有6人回复
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - BioEPI: 11
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
|
鉴定三级结构和四级结构，不要用晶体衍射，很多时候单晶体根就做不出来！ 一级结构的测定我就不说了，基于Ediman降解的自动测序仪测序不难，费用也不是很高。当然，可以用串联质谱或者Ladder Sequencing的质谱测序，如果你们真的非常有钱的话而且愿意如此去花费的话。 首先要保证三级结构和四级结构的分子量与标准品一样，可以直接用MS测定四级结构蛋白质的分子量，这比用电泳和层析精确且方便。而后可以使用肽谱分析，以前酶切割走电泳，现在酶切后用质谱测定各个水解片段的相对分子量是否与数据库中的信息吻合。 而后用红外傅里叶变换光谱测定样品的二级结构的种类是否符合标准品，再用对比两者的紫外光谱和荧光光谱，大致可以比较出两者的三级结构是否相同。有条件的话，可以用圆二色光谱比较样品和标准品的典型的二级结构的数量的比例是否形同，需要相应的软件处理圆二色光谱数据。 做完以上工作后，在保证了分子量相同的前提下，最简单的三级结构和四级结构的鉴定方法就是测定蛋白质的功能，如果功能活性很强，那么综合前面的信息蛋白质很可能就是目的蛋白质。 |
27楼2013-06-08 18:27:43
txyamy
木虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2403.5
- 散金: 307
- 红花: 2
- 帖子: 271
- 在线: 189.7小时
- 虫号: 1035045
- 注册: 2010-06-03
- 专业: 食品加工技术
怎么都木有人回复下呢！自己做板凳啦~期待大家过来交流 给俺点灵感呀~~
2楼2011-10-26 21:35:30
zhengfan1109
银虫 (正式写手)
- BioEPI: 2
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1663.6
- 散金: 565
- 红花: 6
- 帖子: 602
- 在线: 309.3小时
- 虫号: 255973
- 注册: 2006-05-28
- 专业: 细胞周期与调控
3楼2011-10-26 22:33:35
4楼2011-10-27 08:19:44