随着科学技术和人们生活水平的提高，人们对医疗保健品的追求越来越趋向回归大自然，天然营养保健品和天然药物的研究开发已为国内外有关专家所重视。根据中医理论和现代科学技术分析，许多生物活性物质对人类的健康具有重要意义，它能提高机体的免疫活性和诱导干扰素的产生，使失去平衡的机体恢复正常，从而起到保健或对某些疾病的防治作用。天然多糖是一类重要的生物活性物质，具有多方面的生物活性和保健功能，可作为各种药物和保健品的有效成分，对预防和治疗包括癌症在内的多种疾病都具有巨大的潜力。

     多糖作为来自高等植物、动物细胞膜和微生物细胞壁中的天然高分子化合物，是一类具有广泛生物活性的生物大分子物质，又称多聚糖，它是维持生命活动正常运转基本物质之一。人们对于糖类的早期研究只注意到它作为能源物质的重要性和细胞的组成成分，而对多糖生物活性的认识很少。100多年前，德国著名科学家E.Fischer开始了糖类物质的研究，认为糖类及其复合分子具有十分重要的生物功能。1923年M.Heideberger和T.Oswald提出了细菌的抗原部分是多糖而不是蛋白质。20世纪60年代以后，人们逐渐发现作为糖类物质重要组成的多糖类物质有着特殊的生物活性功能，已发现不少多糖物质及其衍生物具有药用价值，尤其在抗凝血、抗血栓、调血脂、调节免疫功能和抗肿瘤、抗放射方面都有显著的药理作用与疗效。1988年，牛津大学生化系副主任德弗克(Raymond A Dwek)教授在《生化年评》中撰写了以“糖生物学”为题的综述，提出糖生物学(blycobloloby)这一名词，这标志着糖生物学这一新的分支学科的诞生。我国对多糖研究起步较晚，但近年来，由于生物学、化学等学科飞速发展，我国对多糖及其复合物化学结构和药理活性研究越来越深入。目前可以肯定的是多糖生物活性与其结构、分子量溶解度、粘度等因素有关，其高级结构比一级结构在活性决定方面起更大作用。由于上述因素差异性，决定多糖具有丰富多彩生物活性。植物多糖是由许多相同或不同单糖所组成化合物，普遍存在于自然界植物体中，其分子量一般为数万甚至数百万，是构成生命活动的四大基本物质之一，同维持生命功能密切相关。大量研究表明，多糖除有免疫调节、抗肿瘤生物学效应外，还有抗衰老、降血糖、抗凝血等作用，且对机体毒副作用小，因此，对多糖研究已成为食品行业热门领域。多糖与免疫功能的调节、细胞与细胞的识别、细胞间物质的运输、癌症的诊断与治疗等，都有着密切的关系。多糖在食品工业、发酵工业及石油工业上也有着广泛的应用。近年来又发现多糖的糖链在分子生物学中具有决定性作用。此外它还能控制细胞的分裂和分化、调节细胞的生长和衰老。此外，糖复合物还与许多疾病，如癌症、细菌和病毒感染等疾病有着密切的关系。由于分子生物学和细胞生物学的发展，发现多糖及其复合物参与各种生命现象的调节，又是细胞表面对各种抗原和药物的受体，多糖与免疫功能的调节、细胞与细胞的识别、细胞间物质的运输、癌症的诊断与治疗等，有着密切的关系，具有能量储存、结构支持、防御功能和抗原决定性等多方面的生物功能[1，2]。目前，以多糖结构、功能和药用研究为核心的糖工程被认为是继蛋白质工程、基因工程后生物化学和分子生物学领域中最后一个巨大的科学问题，21 世纪应当是“多糖生命科学”的时代[3，4]。

      多糖在自然界中以不同形式存在于植物、动物和微生物中，它们除作为结构支持物质外，还具有许多生物活性和药效。多糖类药物主要有动物多糖、植物和真菌多糖、海洋生物多糖等。目前对多糖的生物活性的研究可以肯定与其结构、分子量、溶解度、粘度等因素有关，其复杂的高级结构往往比一级结构在活性上起更大的决定作用，正是由于多糖在各种因素的影响下，因而使多糖表现出多样的生物活性，目前多糖生物活性的研究集中在如下几个方面。

1.3.1多糖的免疫调节作用
     60年代以来，糖类作为光谱免疫促进剂而引起了医学界的广泛关注。多糖不但对机体的免疫系统受到严重损伤的癌症有明显疗效，又能治疗多种免疫缺失疾病，如慢性病毒性肝炎和某些耐药细菌和病毒引起的慢性疾病，有的还能诱导干扰素的产生。已发现有 100 多种中药所含多糖类化合物具有免疫促进作用[15，16]。
      多糖主要通过以下一条或几条途径而发挥促进免疫功能：(1)提高巨噬细胞的吞噬能力,诱导白细胞介素1(IL1)和肿瘤坏死因子(TNF)的生成。具有这种免疫促进功能的多糖有香菇多糖、黄芪多糖、当归多糖、淫羊藿多糖、细菌脂多糖、树舌多糖、海藻多糖等；关于多糖激活巨噬细胞的机制，目前尚未完全清楚。已证明香菇多糖能激活巨噬细胞，能选择性提高小鼠腹腔巨噬细胞的活性，并增加其绝对数量[17]。(2)促进T细胞增殖,诱导其分泌白细胞介素2(IL2。 (3)促进淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)活性，这类多糖有枸杞子多糖、黄芪多糖、刺五加多糖、鼠伤寒菌内毒素多糖等。(4)提高B细胞活性，增加多种抗体的分泌，加强机体的体液免疫功能，这类多糖有银耳多糖、香菇多糖、褐藻多糖、苜蓿多糖等。(5)通过不同途径激活补体系统。
      肿瘤是一类严重威胁人类健康的疾病。肿瘤的发生与机体免疫功能低下关系密切，同时还涉及到许多复杂的因素，诸如自由基代谢紊乱、细胞膜表型改变、PI转换增强、肿瘤组织内血管增生等都与肿瘤的发生、转移相关联。
抗癌活性是多糖类化合物所显示的重要生物活性，其特点是毒副作用小，能提高机体免疫功能并抑制肿瘤生长，与化疗药物适当组合有协同作用并可降低或免除化疗药物的毒副作用，多糖抗肿瘤方式大致可归纳为两类，以细胞毒为主的直接抗癌方式和以免疫为主的间接抗癌方式。多糖能在多条途径、多个层面对免疫系统发挥调节作用。大量免疫实验证明多糖不仅能激活 T、B 淋巴细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞(NK)等免疫细胞,还能活化补体,促进细胞因子生成,对免疫系统发挥多方面的调节作用[18，19，20]。细菌、真菌、酵母、地衣和高等植物、海洋植物中提取的多糖均具有抗肿瘤活性，某些多糖还能对抗化学试剂的致癌作用。多糖作为抗癌剂最大的优点是毒副作用少，与化疗联合作用，还可以对抗化疗药的骨髓抑制等不良反应。多糖是生物反应调节剂的重要组成部分，能激活免疫细胞，诱导多种细胞因子和细胞因子受体基因的表达，增强机体抗肿瘤免疫功能，从而间接抑制或杀死肿瘤细胞[21，22]。 近30年来有不少实验室从事抗肿瘤多糖的研究，尤其是对真菌、植物多糖研究较多。多抗肿瘤多糖分为二种：一种是直接杀死了肿瘤细胞的多糖，这种多糖具有细胞毒性。如茯苓多糖、香菇多糖、灵芝多糖等；另一种多糖是作为生物免疫反应调节剂，通过增强机体的免疫功能而间接抑制或杀死肿瘤细胞的，大多数多糖通过这一途径起到抗肿瘤作用。
    王岳五等[23]研究发现甘草残渣多糖、掌叶大黄、银杏外种皮、枸杞、地黄、黄芪、当归、牛膝、刺五加、人参、商陆(野萝卜)等植物多糖，对小鼠S180肉瘤及艾氏腹水瘤等实验性肿瘤有明显抑制作用。将枸杞多糖注射于S180荷瘤小鼠腹腔，可明显抑制瘤重。枸杞多糖能显著抑制人宫颈瘤Hela细胞和人胃腺癌MGC 803细胞的生长和繁殖，抑瘤细胞克隆的形成[24]。
1.3. 2抗病毒
      多糖通过增强宿主免疫机制可以抵抗细菌、病毒、寄生虫的侵袭，因而具有广泛免疫调节作用。许多研究表明多糖对多种病毒都有抑制作用，一些多糖本身没有抗病毒作用，但经结构修饰以后具有了较强的抗病毒活性，多糖的结构修饰包括硫酸化、乙酰化、烷基化等。其中以硫酸化多糖的效果最为明显，如硫酸葡聚糖(Dextansulphate )、角叉菜胶(Carrageenin )、肝素(Heparin )、硫酸软骨素(Chondroition)等对HIV有抑制作用。硫酸根对抗HIV病毒目前认为是必需的，并且其抑制HIV的作用同分子中硫酸盐含量有关，含量越高，其抗HIV的作用越强。L.B. Talarico [25]等报道了硫酸多糖对dengue病毒作用。1987 年，德国的 Bayer 公司研制的木聚糖硫酸酯对艾滋病有较好的疗效。日本的研究也表明，地衣多糖及右旋糖酐经硫酸化修饰对 HIV－1 病毒有明显的抑制作用。中科院上海有机所田庚元等1996年报道，牛膝多糖硫酸酯有抗乙肝病毒的活性[26-29]。人们对将多糖应用于因病毒感染所致艾滋病等疑难疾病的治疗寄予很大的希望。现己证实香菇中含有一种干扰素诱导剂，能干扰病毒蛋白质的合成，提高抗病毒免疫力[30]。
1.3.3降血糖、降血脂活性
      植物多糖可通过调节糖代谢酶的活性，抑制糖异生，促进葡萄糖的利用，达到改善糖代谢紊乱和胰岛素抵抗的目的。多糖并不增加胰岛素的分泌，而是作用于糖代谢的酶。
   人们在药理实验中发现：许多多糖对正常小鼠或药物致高血糖的小鼠有降血糖的作用。南瓜多糖、人参多糖、麻黄多糖、知母多糖、高山红景天多糖等经实验证明均有降低血糖作用。茶多糖具有明显的降血糖的作用 ,其中有降血糖作用的多糖为半乳葡聚糖[31-32]。有大量动物试验表明，植物多糖能降低正常及实验性糖尿病鼠的血糖水平，与其促胰岛素分泌的作用有关，植物多糖能有效地对抗肾上腺素、胰岛血糖素引起的高血糖[33]。高血脂症是指血液中一种或多种物质成分异常增高的病症，它能直接导致动脉粥样硬化、冠状动脉粥样硬化等心脏病，而后者的死亡率较高，因此积极防治高脂血症具有十分重要的意义。周国华等采用不同浓度黑木耳多糖对高脂模型小鼠进行试验，研究黑木耳多糖对高脂模型小鼠甘油三酯(TG)，总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDLC)和低密度脂蛋白(LDL-C)的影响。结果表明，黑木耳多糖组小鼠的血清甘油三酯(TG)，总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL-C)均不同程度低于高脂模型组，而高密度脂蛋白(HDL-C)却极其显著高于高脂模型组，提示黑木耳多糖确具显著的降血脂作用[34]。
1.3.4抗氧化
      许多中药多糖都具有提高抗氧化酶活性、清除自由基、抑制脂质过氧化,从而保护生物膜的作用。多糖对物理的、化学的及生物来源的多种活性氧(ROS)具有清除作用，能减少丙二醛(MDA)的生成量，增加超氧化物歧化酶(SOD)、谷肤甘肤过氧化物酶(GSHPX)的活性等，在中药药理中发挥重要作用。现多种植物和真菌多糖具有体内外的抗氧化作用。Yeung 报道云芝多糖能增强 GSHPx 的活性,促进 H2O2的清除[35-38]。
1.3.5 其他生物活性
      由于多糖结构的复杂性，决定了多糖具有复杂的生物学活性。除上述生物学活性外，已发现多糖还具有降血压、防衰老、抗凝血作用、抗辐射、抗炎、抗溃疡作用、类似肾上腺皮质激素和促肾上腺皮质激素作用、阻抗放射性元素和毒素的吸收、镇静剂功用、早期引产作用[39-42]。
总之，多糖具有多种多样的生物活性。而且，某一多糖可同时具有抗肿瘤、抗病毒、降血糖、降血脂等多种生物活性，如从宁夏枸杞子中提取得到的多糖具有抗氧化、抗肿瘤、防衰老及增强免疫力等方面的作用。香菇多糖、灵芝多糖、银耳多糖等也都具有多方面的功能。

      多糖(polysaccharide)是由单糖之间脱水形成糖昔键，并以糖昔键线性或分支连接而成的链状聚合物。由一种单糖组成的多糖称为同聚糖，而由一种以上的单糖组成的多糖称为杂多糖。作为一大类天然产物，多糖广泛存在于动物、植物、微生物等有机体中。在动物体内主要存在于细胞膜中，而在植物中主要存在于细胞壁中。根据组成与结构的不同，多糖的种类不计其数。到目前为止，已有300多种多糖类化合物从天然产物中被分离出来，其中从植物，尤其是从中药中提取有大量糖类。植物多糖包括淀粉，纤维索，果聚糖，半纤维，树胶，粘液质，粘胶质，卡拉胶，及其它葡聚糖。植物来源多糖其单糖组成大多是中性糖及糖醛酸。我国近年来对植物多糖，特别是中草药多糖的药物活性已有广泛报道，例如:报道降血糖的中草药多糖己达到100余种，其中有显效的有20多种，如茶多糖、南瓜多糖等。其它如具有抗肿瘤、抗衰老、抗病毒、抗放射、抗突变、抗遗传损伤、抗凝血.、抗血栓等药物活性的多糖报道也很多，如香菇多糖、云芝多糖、银耳多糖、虫草多糖等。果胶也是一种植物多糖，它是植物特有的细胞壁组分，其来源非常丰富，如水果皮、向日葵花盘及其他植物。果胶可作为果冻食品、巧克力等的稳定剂，医药品及化妆品等工业的乳化剂，脱水剂，应用非常广泛[5，6]。在我国传统中医学理论中，许多水果蔬菜都是药食同源，一方面可以作为日常食用的食品，另一方面也可以入药治疗疾病。大量现代医学实验也证明，食用某些水果蔬菜在治疗某些疾病方面具有显著的功效[7]。其活性物质大多与其中所含的植物多糖有关。动物多糖包括糖原，甲壳素，肝素，硫酸软骨素，透明质胶，硫酸角质素，酸性粘多糖，糖胺聚糖。肝素、硫酸软骨素、透明质酸、硫酸角质素者属糖胺聚糖，由于在体内常以蛋白质结合状态存在，故统称为蛋白聚糙。微生物多糖包括细菌和真菌(包括霉菌和酵母)多糖，是研究得比较详细的一类多糖。与动物和植物多糖相比，微生物多糖具有与它们相似庄性质，而且其产量和质量不受自然条件的影响。目前国内外从真菌(主要是担子菌纲和子囊菌纲)得到的真菌多糖已达数百种，有关真菌多糖的研究既深又广，己开发利用的也有不少。在日本，香菇多糖和云芝蛋白多糖于70年代末期进入临床，用于肿瘤等疾病的免疫治疗。灰树花多糖、裂褶多糖(SPG)等已在欧美、日本临床上广泛应用，在我国云芝多糖，槐耳多糖分别作为国家中药二类、一类新药投人生产[8]。1984年，苏联人在荷兰召开的第十二次国际碳水化合物讨论会上报道了用全合成特定结构的荚膜多糖作疫苗，受到与会者的极大兴趣。尔后，有关真菌多糖的研究既深又广，如酵母菌多糖、食用菌多糖，特别是食用菌多糖的研究，其中以香菇多糖研究得较清楚。另外，植物多糖的开发也倍受人们的青睐，由于我国是中药的起源之地，而糖类是中药材中普遍存在的成分，在对各种中药材的化学成分研究的过程中，人们都少不了对其中多糖的关注。植物多糖研究得比较深入是稻草多糖、麦秸多糖、竹多糖、黄芪多糖、刺五茄多糖、茶叶多糖等。

      多糖是a-碳原子上带有羟基的多羟基醛或多羟基酮，或能水解生成这样的化合物的物质。可分为四类：单糖、二糖、寡聚糖(含3个以上的单糖)和多糖。糖分子中一般都含有儿个不对称原子，所以大都具有旋光性。多糖(polysaccharide)是大然化合物中最大族之一，它是有机体能量的主要来源。多糖是由许多单糖分子，通过昔键连接而成的多于20个糖基的糖链。由于连接方式不同，可以形成直链多糖、叉链多糖，有时也可以形成环状的多糖。多糖的结构分析较蛋白质结构分析复杂。这是因为组成多糖的单糖品种繁多，而且即使只有一种单糖，其连接方式也不同及可能有分枝(蛋白质没有分枝)，所以多糖的结构可分为一级结构、二级结构、二级结构和四级结构[9]。
一级结构：多糖一级结构包括糖基的组成、糖基的排列顺序、相邻糖基的连接方式、异头物构型以及糖链有无分支、分支的位置与长短等。与蛋白质和核醛相比，糖的一级结构非常复杂。例如，两种氨基酸只能构成一种二肽，而两种相同单糖能结合形成11种不同的二糖。另外，通过硫酸化、乙酞化、磷酸化、甲基化等衍生形式还可形成糖衍生物[10]。
    二级结构：多糖的二级结构指多糖骨架链间以氢键结合所形成的各种聚合体，只关系到多糖分子中主链的构象，不涉及到侧链的空间排布[11]。多糖的二级结构形式主要依赖一级结构的排布 [12]。
    三级结构：多糖链一级结构的重复顺序，由于糖单位的羚基、氨基以及硫酸基之间的非共价相互作用，导致有序的二级结构空间有规则而粗大的构象，即是多糖链的三级结构[13]。
四级结构：多糖的四级结构指多聚链间非共价链结合形成的聚集体。多糖链的聚集作用可在相同的分子间进行，也可在不同的多糖链间进行。如黄杆菌聚糖多糖链与半乳甘露聚糖骨架中未取代区域之间的相互作用[14]。
多糖的结构形态是各个单糖残基在空间相对定位的综合，解析这些定位对于理解多糖的生物学功能有极其深刻的意义。

1.4.1多糖的提取 [43，44]  
    多糖广泛地存在于动物、植物及微生物中，生物体内多糖除以游离状态存在外，也以结合的方式存在。结合型多糖有与蛋白质结合在一起的蛋白质多糖，也有与脂质结合在一起的脂多糖等。提取前应根据多糖的存在形式及提取部位的不同决定提取剂。现在提取的方法有四种：水提醇沉法、碱提法、酶法及冻融法，其中前三种方法更常用些。提取可采用水提取法、中性盐溶液提取法、碱提取法、水解酶消化提取法、蛋白酶水解提取法等。同一原料可以先后用水、稀碱、稀酸或稀盐提取，也可分别用上述溶液提取，但所得产物会有区别。另外，在多糖的提取过程中，可采用一些方法增加多糖的提取率，如原材料先用超微粉碎处理，以单一或复合酶、冻融、超声波、双水相萃取、微波等进行辅助提取。糖广泛地存在于动物、植物及微生物中，生物体内多糖除以游离状态存在外，也以结合的方式存在。结合型多糖有与蛋白质结合在一起的蛋白质多糖，也有与脂质合。提取中要防止多糖的降解，也有报道，温和条件下(如热水)提取得到的多糖为天然型，而剧烈条件下(冷碱或热碱)提取的多糖为螺旋型。在动物多糖方面:王长云、管华诗等近来研究表明，在不改变糖链结构的前提下先用碱处理，再用蛋白酶水解，对于动物多糖的释放十分有效。所得提取液中小分子组分可用渗析法、凝胶过滤法除去，多糖中残留的游离蛋白质可用蛋白沉淀剂如三氯乙酸、鞣酸等除去，少量蛋白则用S e v a g 法除去。除去蛋白质等非多糖物质后，提取液经冷冻干燥( 冷冻干燥前可减压浓缩)或沉淀后干燥得到动物多糖粗制品。

1.4.2.1 脱蛋白
   经有机溶剂沉淀获得的活性多糖中，还含有大分子蛋白质、脂类、有机溶剂不溶的一些低分子量有机物及无机物。首先将多糖粗提物中的游离蛋白脱去，再去除其他小分子杂质。游离蛋白去除的方法有 Sevage 法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法及酶法。
（1）Sevage 法：利用蛋白质在三氯乙烷等有机溶剂中变性的特点，将提取液与 Sevage试剂[氯仿：正丁醇=5：1（V/V）]5：1 混合，振荡，离心，变性后的蛋白质介于提取液与 Sevage 试剂交界处。此法的优点是条件温和，不会引起多糖的变性。
（2）三氟三氯乙烷法：将提取液与三氟三氯乙烷 1：1（V/V）混合，振荡，离心，蛋白质被抽提到溶剂中，加以脱除的方法。
（3）三氯乙酸法：将提取液与 20～30%的三氯乙酸溶液 1：1（V/V）混合，蛋白质在三氯乙酸的作用下形成胶状析出，加以脱除的方法。
（4）木瓜蛋白酶法：在提取液中加入定量的木瓜蛋白酶粉或预先将木瓜蛋白酶配制成一定浓度再加入提取液中，保温一定时间后离心，加以脱除的方法[45，46，47] 。
上述四种方法中Sevage 法是脱除蛋白质的经典方法，但存在着有机试剂用量大，耗时较长，易造成样品损失的缺点[48]；三氟三氯乙烷法效率高，但溶剂易挥发；三氯乙酸法作用剧烈，对含呋喃糖残基的活性多糖有破坏作用；木瓜蛋白酶法适用于结合蛋白，因此张倩[49]等人建议采用 Sevage 法与木瓜蛋白酶法联用。

   此外:多糖与蛋白质的结合不是物理或离子结合，而是共价结合。经碱提取及蛋白酶水解的组织消化液，是组分及性质相近的多糖混合物，它们的多羟基及强电解性
使其处于可溶状态， 除去残留蛋白质和各种小分子将为多糖的进一步分级分离创造条件。利用各种多糖的溶解度不同及电荷密度的差异进行分离，由于各种多糖结构和活性的不均一性和分子量的高分散性，利用上述性质分得单一多糖后，还可按其理化性质及生物活性进一步分离.

     多糖中常含有一些色素(游离色素或结合色素)，根据其不同性质采取不同的方法。常用的脱色方法有：离子交换法、氧化法、金属络合物法、吸附法(纤维素、硅藻土、高龄土、活性炭等)。DEAE-纤维素是目前最常用的脱色方法，通过离子交换柱不仅达到脱色的目的，而且可以分离。双氧水脱色法：利用双氧水的氧化作用50-60℃对多糖中的色素物质进行降解，使色素产生的颜色得以脱去，但反应条件较剧烈，温度、时间须控制良好，以防止高温长时间下多糖的降解。活性炭脱色法：利用活性炭对色素的吸附作用进行脱色。活性炭为黑色细微粉末，无臭，无味，具有无毒、脱色脱臭效果良好的特点，可以反复使用，成本低。但其用量、温度、时间等反应条件须经试验才能得到最好效果。
    对于同时含有游离蛋白质和色素的多糖，可通过生成金属络合物的方法，同时除去蛋白和色素。方法是加入费林试剂生成不溶性络合物，经分离后用阴离子交换树脂分解络合物。吸附脱色法也常用，如通过活性炭、高岭土、硅藻土达到纯化的目的。

      采用一般方法提取的多糖，通常是多糖的混合物，即是多分散性的。其不均一性表现在化学组成、聚合度、分子形状等的不同，分级的方法可以达到纯化的目的。可按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基因的性质分级(如按电荷性质分级的电泳、离子交换层析等)。

    1有机溶剂沉淀法：多糖在有机溶剂里溶解度极小，利用有机溶剂沉淀是多糖纯化最常用的方法。最常用的有机溶剂是甲醇、乙醇、丙酮。
   2季胺盐沉淀法：长链季胺盐能与酸性多糖成盐形成水不溶性化合物，可分离酸性及中性多糖。常用的季胺盐是十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)及其碱(CTA-OH)和十六烷基吡啶 (CPC)。实验时必须严格控制多糖混合物的pH值小于8及无硼砂存在，否则中性多糖也会沉淀出来。一般地说，酸性强或分子量大的酸性多糖首先沉淀出来。

      利用不同的柱填料，采用不同的洗脱剂分离出不同祖份，检测手段国内仍沿用经典的苯酚-硫酸法、蒽酮-硫酸法，国外用LKB柱层析系统，用比旋度、视差折光及紫外检测器，各组分的峰位自动记录，分离效果好且方便。
（1）纤维素柱层析：常用不同浓度乙醇水溶液由高而低进行洗脱，将各种多糖分离开来。
（2）离子交换柱层析： 此法适合于分离各种酸性、中性多糖和粘多糖。常用的交换剂为DEAE-纤维素和ECTEOLA-纤维素。这种分级不仅按电荷性质不同，同时也有分子筛的作用，如带负电荷的多糖可在阴离子型DEAF一纤维素柱或DEAE-Sephadex柱上达到分级，酸性多糖可在阳离子型的梭甲基(CM-Sephadex)或磺酸乙基(SE-Sephadex)等凝胶柱上分离。
（3）凝胶柱层析[51]： 凝胶柱层析是根据多糖分子的大小和形状不同进行分离。常用的凝胶有葡聚糖凝胶(Sephadex)及琼脂糖凝胶(Sepharose)及DEAE-Sephadex。此法不适应粘多糖的分离。洗脱剂为各种浓度的盐溶度及缓冲液，它们的离子强度最好不低于0.02 。
（4）其他柱层析    此外，亲和层析和高压液相层析也会被用来纯化多糖。还有人用活性炭及硅胶作为载体的柱层来分离多糖；用硼砂性型的离子交换树脂分离中性多糖，用大孔树脂来纯化多糖。

      选用不同规格的超滤膜和透析袋进行超滤和透析，以及超速离心操作，可按分子大小差异把多糖样品分级。超滤和透析更常用于除去小分子物质。

      区带电泳主要按多糖的电荷性质不同分级，常用的有聚丙烯酞胺凝胶电泳、醋酸纤维素薄膜电泳。

经过分级纯化的多糖，在测定结构前须纯度鉴定。多糖的纯度不能用通常化合物的纯度标准进行衡量，因为多糖纯品在结构上也并不是完全一致的，我们通常所说的多糖纯品实际上是一定分子量范围的均一组分。目前，检查纯度最常用的方法主要有:
[quote](1)比旋度法  不同的多糖比旋度不同，相同比旋度则证明为均一组分。
(2)超离心法  微粒在离心场中沉降的速度与微粒的密度、大小与形状有关，若形成单一区带则表明微粒分子的密度、大小和形状相似。
(3)高压电泳法  多糖在电场作用下，按其分子大小、形状、及其所带电荷不同而移动的距离不同。电泳后呈单一色斑或单一峰则为均一组分多糖。
(4)凝胶过滤法  分为常压和高压凝胶柱层析法（HPGPC）。凝胶柱层析图呈现对称的单峰则为均一组分。若有“拖尾”现象，说明其均一性不够好。
(5)光谱扫描法在180nm -640nm波长碱扫描，在260, 280nm处应无核酸和蛋白质的特征吸收峰。
(6)纸层析、GC , HPLC、冰融法等。GC, HPLC测定组成多糖的单糖的摩尔比是否恒定，用不同的柱型测定结果更为可靠。纸层析法呈单一集中斑点则为均一组分。

多糖分子大小不均一，其某一分子量范围成分有药理活性，而另一分子量范围则不具有药理活性或具有一定的毒副作用，因此，分子量分布既是多糖类药物有效性控制的指标，又是安全性控制的指标。多糖分子量的测定没有一个绝对准确的方法，其分子量只是代表相似链长的平均分布。不同方法所测得的分子量不同，即使同一多糖，其重均分子量和数均分子量也相差较大。
   [quote] (1) 高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）：用己知分子量的多糖标准品对照，进行凝胶柱层析，求得洗脱体积Ve和外水体积Vo，以Ve/Vo对logMr作标准曲线，将相应样品的Ve/Vo
值带入标准曲线求得其分子量。
    (2) HPLC：将凝胶柱改为高效液相色谱柱，其余同凝胶过滤法。
    (3) 超滤法：应用适宜的分子量节流值的超滤膜，以各种己知分子量不同的多糖作标准，测百分滤过量，以百分滤过量对分子量作标准曲线，测定样品的百分滤过量而求其近似分子量。
    (4)其他方法：超速离心沉降法、渗透压法、蒸气压法、端基法、光散射法、粘度法、凝固点下降法、基底辅助激光解吸电离质谱法等，各有其适用范围优点。

多糖的结构分析主要以一级结构为主，因为多糖二级及以上结构是以一级结构为基础的。分析多糖结构有许多方法，包括化学方法、物理方法和生物方法[56] 。

化学方法中有下列几种方法：
(1)水解法：通过水解多糖链分解为各个单糖，然后进而分析，这是分析多糖链组成成分的主要手段。水解法包括完全酸水解、部分酸水解、乙酰解和甲醇解;
(2)高碘酸氧化法：高碘酸可以选择性的氧化断裂糖分子中的连二羟基或连三羟基处，生成相应的多糖醛、甲醛、甲酸，反应定量地进行。
(3) Smith降解：Smith降解是将高碘酸氧化产物还原后进行酸水解或部分水解。由于糖基之间以不同的位置缩合，用高碘酸氧化后则生成不同的产物，由降解产物可以推断着键的位置。
(4)甲基化反应：将多糖中各种单糖残基中的游离羟基全部甲基化，然后将甲基化多糖水解得到部分甲基化的单糖，分析这些单糖，就有可能推测组成多糖分子中单糖间连接的位置。

物理方法对多糖结构的分析具有快速、准确性高等特点，是糖链结构分析不可缺少的手段。多糖高级结构的分析主要采用物理方法。主要的物理分析方如下：
[quote]（1）X-射线衍射：X-射线衍射与计算机模拟技术相结合可以从原子水平对多糖结构进行分析，是确定多糖立体构型的有力工具之一。多糖通常是不能结晶的,但在适宜的条件下,它可以微晶态存在。所以进行衍射分析的样品必须通过外界的诱导使其中有相当部分呈现微晶态。
（2）GC、HPLC、CE色谱法：GC和LC主要应用于单糖和甲基化单糖的分离和鉴定，为多糖的组分分析提供依据。GC需要样品进行衍生化，LC则可直接进样。此外，还常用于多糖的分离和纯化操作以及多糖分子量的测定。CE目前只限于多糖中某种特定功能团和组成多糖各单糖的定量分析。
（3）质谱技术：GC-MS, MS-MS连用、同位素标记等方法的发展，使MS在糖的序列分析和结构鉴定研究中起着越来越重要的作用。近年来由于FAB-MS, ESI-MS和MALDI-MS(基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱)的出现，利用质谱还可以测定糖链的分子量及糖链的一级结构[57]。近年来，Vernon等人研究了ESI-MS与CID ( collision-induced dissociation)相结合研究多糖的分子量、序列、链连接及分支的方法[58]。
（4）电泳技术[59]
毛细管电泳技术不仅仅是一种分离手段，还可用于寡糖链的纯度和结构分析，又可对寡糖的酶解产物进行定性和定量分析，从而得到寡糖链的完整结构。SDS-PAGE-PVDF技术可较轻松地获得氨基酸和糖基组成、pmol级糖蛋白的肽链和糖链结构以及糖肽连接方式。
（5）红外光谱：IR在多糖结构分析上主要是确定吡喃糖的贰键构型，以及常规观察其他官能团。一般主要观察730-960cm-1的范围，如对于α-吡喃糖，δC1,-H在845cm-1，而β-吡喃糖，δC1-H在890cm-1。　
(6) NMR对多糖的结构特征可通过化学位移、偶合常数、积分面积、NOE及弛豫时间等他参数来表达，解析多糖结构中苷键的构型及重复结构中单糖的数目。
对多糖的高级结构研究的方法还有很多, 除了上面提到的外，还有圆二色谱( CD)、原子力显微镜( AFM )等方法。但是因为多糖的复杂性,至今还没有一种有效的研究多糖全结构的方法。将不同的研究方法联用是研究多糖高级结构的发展方向。[/

生物学方法主要是利用特异性糖苷酶进行的酶法分析酶促反应具有高度专一的特性，副产物少，在糖链的结构分析中是一种很好的方法。多糖链中糖苷键类型可以利用α-糖苷酶和β-糖苷酶对多糖底物的催化反应来确认，利用酶法分析糖肽连接方式。
此外，还可以利用免疫学方法来分离糖链的结构，其原理为：抗原和抗体会相互结合, 一定结构的多糖(寡糖) 会抑制抗原-抗体的结合, 不同的糖(半抗原) 有不同的抑制常数。当某种未知结构的糖链对抗原和抗体的结合产生了抑制, 通过测定其抑制常数再与已知结构的糖链相比较, 有相近抑制常数的多糖, 其结构也相似。

Originally posted by caojinxuan at 2006-12-17 08:35 PM:
动物里面主要是氨基多糖吧 ？

Originally posted by caojinxuan at 2006-12-17 09:14 PM:
我想知道多糖怎样从嘴里吃进去，然后怎样代谢到活性位点的 ？在人体消化道，尤其是胃部高酸环境下为什么不被分解掉 ？在细胞里面是通过抗体抗原，还是其他作用机理起到生理活性的 ？

Originally posted by shuizirou at 2006-12-18 12:24 AM:
好像在哪里见过啊？

Originally posted by donnafeng at 2006-12-17 10:28 PM:
蛋白多糖去掉蛋白是不是会影响其生理活性

Originally posted by etingtian at 2006-12-18 01:02 PM:
好 不错 期待第二课

Originally posted by cheng7692 at 2006-12-18 10:27 PM:
想问问多糖现在的研究前沿大概集中在什么范围？是结构对人体的影响，是活性成分提取坚定，或是肿瘤治疗什么的？

Originally posted by daad at 2006-12-18 11:02 PM:
如果类似人参，那么其保健作用是否也是短期刺激
人的肌体的功能，使免疫力等上升，用久了会不会
失效甚至依赖，一旦停止使用是否人的肌体的功能
反而下降？因为人不能一直处在刺激状态下。
我个人不赞成轻易使 ...

Originally posted by xijihu at 2006-12-19 21:02:


你说的这些问题.这些方面目前研究较少，也未见对多糖药效功能作用时效的报道，目前这一方面的研究越来越受到国内外学者的关注，它也必将成为多糖研究的另一个热点．
　　　对于您的观点，我个人比较认同，作 ...

Originally posted by 人类牧师 at 2006-12-18 11:29 PM:
对多糖的工艺方面我想问个问题:
       超临界CO2萃取是比较时髦的技术,不知道能否用于多糖的提取,您是否发现有类似文献报道.
谢谢