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chuey木虫 (小有名气)
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[求助]
求助微生物琥珀酸脱氢酶测定问题
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| 到底怎么处理啊，是要上清液还是沉淀啊。线粒体怎么破碎啊 ？ |
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 生工检测理论与实务 |
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chuey
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3楼2011-10-11 20:29:01
HarveyWang
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+5, MicEPI+1): 强大，学习了 2011-10-11 20:56:17
scelab(金币+5, MicEPI+1): 强大，学习了 2011-10-11 20:56:17
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线粒体测定SDH可以用磷酸缓冲液破碎，pH就用SDH测定反应液的pH即可，一般为pH7.5。就用100 mM的KH2PO4-NaOH冰浴悬浮，超声破碎。一般50-100次超声，每次3sec，间隔5sec。 若破碎液只是测定SDH，则可以再破碎后向其中加入2%的Tween-80，然后震荡几分钟，这样可以充分提取SDH。 SDH 测定需要细胞全液。SDH在细胞破碎液离心上清和细胞沉淀中 都有，都不能忽略。不信，你可以分别测定上清和沉淀的SDH活性看看。 |
2楼2011-10-11 20:07:31
HarveyWang
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4楼2011-10-11 21:28:13
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5楼2011-10-12 20:17:34