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HarveyWang

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+5, MicEPI+1): 强大，学习了 2011-10-11 20:56:17

线粒体测定SDH可以用磷酸缓冲液破碎，pH就用SDH测定反应液的pH即可，一般为pH7.5。就用100 mM的KH2PO4-NaOH冰浴悬浮，超声破碎。一般50-100次超声，每次3sec，间隔5sec。

若破碎液只是测定SDH，则可以再破碎后向其中加入2%的Tween-80，然后震荡几分钟，这样可以充分提取SDH。

SDH 测定需要细胞全液。SDH在细胞破碎液离心上清和细胞沉淀中都有，都不能忽略。不信，你可以分别测定上清和沉淀的SDH活性看看。

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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】

2楼2011-10-11 20:07:31

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【答案】应助回帖

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scelab(金币+9, MicEPI+1): 谢谢热心回复~ 2011-10-13 01:00:12

引用回帖:

3楼: Originally posted by chuey at 2011-10-11 20:29:01:
那个要破碎的是直接用菌丝体还是用离心得到的线粒体啊？还有那个要用全液的话，好像有悬浮物吧，会不会影响测定结果啊？问题好像有点多，谢谢了。

你破碎真菌的菌丝体，就相当于破碎线粒体了。
如果你只想测定线粒体的SDH活性，那么你需要先提取线粒体再测定。

用全液，当然有悬浮物，
关键是你要的是全液的，还是上清的，还是沉淀的SDH活性。

一般来说，测定时20-50uL 测活性就够了。
在反应的保温阶段，样品造成的吸光值背景就稳定了。
而你测定的是吸光值的下降。

我是加入底物启动反应，而不是加入酶液启动反应的。

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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】

4楼2011-10-11 21:28:13

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