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[交流] 干粉培养基的质量控制

商品干粉培养基配制后，必须经过严格的理化及细菌学检定。检定合格后方可出售。干粉培养基的质量控制应包括①培养基的颜色、性状（包括高压前后）；②pH值；⑧液体澄明度。固体凝胶强度；4干燥失重；⑤微生物检定；⑥有效期。对于培养基微生物检定，要用美国标准菌株( ATCC)或中国医学微生物菌种保藏中心(CMCC)的标准菌株，要符合培养基分离、选择鉴别的阳性、阴性特征。无菌试验培养基、增菌、基础营养培养基等要做灵敏度试验。
灵敏度试验：方法见《中华人民共和国药典》 2005版三部无菌检查法中培养基灵敏度检查。
质控标准菌株：质控标准菌株应按医用细菌菌种复苏方法启开，接种在相应的培养基中。例如肠杆菌通常使用营养琼脂培养基，链球菌培养在巧克力琼脂或血琼脂培养基上，厌养菌需培养在疱肉培养基中或在厌氧环境中培养，真菌需在真菌培养基中。启开后的菌株应具有菌株的典型特征：色素的产生、溶血、菌落形态、菌苔的黏稠性。如肺炎克雷伯菌、短芽胞杆菌，菌苔黏稠，用接种环可拉出丝。如果菌株失去原有的特性，则视为菌株变异。启开菌株应使用牛肉浸液制备的新鲜培养基，可保持菌株原有的特性。
从保藏中心得到的菌株为零代，菌株启开后应分二份，一份供保存菌种用，一份供传代用为工作种子批。工作种子批使用不超过5代。保存的菌种通常接种于半固体培养基，生长后用石蜡密封，4℃保存。
工作种子批接种适宜的培养基，35℃培养24-48小时，用接种环刮入无菌生理盐水中，制成菌悬液，将菌液稀释，与标准比浊管相同浓度，再用生理盐水做10倍系列稀释。
关于医用细菌菌种复苏方法的说明：
1．复苏菌种前应准备适于该菌种生长的固体、液体培养基和培养环境，所有操作均应在符合生物安全保护及无菌条件下进行。
2．启开菌种宜采用锯开法（锯开前用70%酒精棉消毒菌种管外壁）。用吸管将液体培养基0.3 ml注入被启开的菌种安瓶中并吹打，使安瓶中的冻干菌种溶解成菌悬液。
3．将上述菌悬液全部吸出，分别接种到固体斜面和液体培养管中，一般放置在37℃培养箱培养18-24小时。对需要特殊培养条件的细菌，如需5%-10% CO2或厌氧条件等，应分别于C02培养箱或厌氧培养箱中培养。
4．次日观察菌种的生长情况，如菌种未生长，应继续培养至72小时。
5．复苏后的菌种在传1～2代后使用。
通常干粉培养基的检定接种液体培养基最适宜菌量为10-100个菌/ml，固体为100-1000个菌／ml，在平皿上应有100-1000个菌落生长，即菌落形成单位-CFU(Colour Form Unit)。
平皿试验：
取质控菌株24小时营养琼脂斜面新鲜培养物分别制成菌悬液，将菌液稀释与标准比浊管相同浓度，以生理盐水逐管10倍系列稀释至规定浓度，每株菌接种2-3块平皿，每平皿接种0.1ml，用接种环或L-玻璃棒划线，置37℃培养24小时观察结果。
细菌生化试验：
将质控菌株24小时营养琼脂新鲜培养物直接接种生化培养基内，置37℃培养24小时，观察结果。
以下是培养基常用检定菌的细菌比浊标准
空肠弯曲菌 25×108/ml
破伤风梭菌 l×l08／ml
厌氧棒杆菌 4×l08／ml
肺炎双球菌 3×l08／ml
大肠埃希菌 8×l08／ml
流感嗜血杆菌 23×l08/ml
脑膜炎双球杆菌 8×l08／ml
铜绿假单胞菌 10×l08／ml
甲型副伤寒沙门菌 10×108/ml
乙型副伤寒沙门菌 10 ×108/ml
伤寒沙门菌 10×108／ml
痢疾志贺菌 8×108／ml
福氏志贺菌 8×l08／ml
宋内志贺菌 8×108/ml
甲型溶血性链球菌 2×108/ml
霍乱弧菌 18×108/ml
OI群霍乱弧菌El - Tor生物学变种18×l08／ml
小肠结肠炎耶尔森菌 11×108／ml

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