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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因敲除细胞阳性纯和子筛选
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清风寨

银虫 (小有名气)

[求助] 基因敲除细胞阳性纯和子筛选

本人现在想做了基因敲除的细胞，想了想我的载体上除了荧光没有其他筛选标记也没有抗药性  。想分出阳性细胞可是我所知道的只有用96孔板来稀释 ，这是很笨的方法不知各位高手有没有好的方法。另外敲除的细胞很大可能是杂合子 等位基因还能表达 ，我只想得到纯和子 不知各位有什么好的办法  谢谢
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hf2016

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冷风过心变热
1楼 2011-10-09 20:36:18
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子

【答案】应助回帖

清风寨(金币+5): 我也这么想过 用RT-PCR鉴定 或者我也可以用敲出掉的序列设计引物做普通的PCR 就是要筛96孔板才嫌麻烦的 谢谢你 有想法还请交流 只要是想法都行 2011-10-11 21:50:54
我见别人用的PCR的方法筛选的，他们用的是插入失活的方法，用微量的RT-PCR的盒子在96孔板里面直接拿单克隆筛选，你是不是也可以这样试试？
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可以用QQ找我……
8楼2011-10-11 10:02:35
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

清风寨(金币+2): 谢谢 我做的是细胞 我后面要检测酶活 DNA 还有RNA的 觉的拿到纯合子比较好讲故事 2011-10-09 21:10:41
1.你敲除的是什么细胞？动物？植物？真菌？还是细菌？如果是后两个不大需要考虑是否纯合子的问题，植物的么，笨方法就是不断的自交，拿到纯合子，动物细胞没做过，不了解，
2、不过我觉得你可以试一下用流式细胞术加细胞分拣，这方面的文献应该有不少，就是基于荧光进行细胞分拣的，
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显微镜下的世界很精彩！
2楼2011-10-09 21:01:28
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

额。植物和微生物都做过，细胞还真不知道……没做过啊
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显微镜下的世界很精彩！
3楼2011-10-09 21:11:58
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hf2016

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
坐等答案揭晓
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一切开始于结束之后
4楼2011-10-09 21:13:33
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