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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 散金币，不同蛋白混合后如何区分开？
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承诺85

金虫 (小有名气)

[求助] 散金币，不同蛋白混合后如何区分开？

求助：两种不同蛋白混合后加热形成凝胶，通过什么方法或手段在显微镜条件下区分开二者的分布和连接方式呢？就像蛋白和多糖可以通过荧光染色后用激光共聚焦显微镜区分二者（蛋白有荧光，多糖没有荧光）。请高手给出建议，多谢。
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1楼 2011-10-05 22:32:48
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18853850850
2楼2011-10-06 08:53:18
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丁武辉

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

承诺85(金币+2): 2011-10-06 20:13:48
可以跑一下电泳试试呀，双向电泳
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快乐每一天
3楼2011-10-06 14:28:20
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yxwb-234

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
承诺85(金币+2): 2011-10-07 19:40:20
adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利！ 2011-10-08 19:34:00
这两种蛋白是已知的吗，如果已知，可以跑电泳，或者western blot确定一下蛋白的结构，比旋度是多少，有哪些特定的氨基酸结构，即使两者混合在一起，也可以通过对不同氨基酸的标记区分开它们。如果是未知的，就不好说了，会有些困难。需要很多时间摸索的。
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4楼2011-10-07 17:07:41
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zhengfan1109

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

承诺85(金币+2): 2011-10-07 18:47:22
引用回帖:
1楼: Originally posted by 承诺85 at 2011-10-05 22:32:48:
求助：两种不同蛋白混合后加热形成凝胶，通过什么方法或手段在显微镜条件下区分开二者的分布和连接方式呢？就像蛋白和多糖可以通过荧光染色后用激光共聚焦显微镜区分二者（蛋白有荧光，多糖没有荧光）。请高手给出 ...

LZ自己提出的这个方案呢？
蛋白有荧光，多糖没荧光可以区分，
蛋白A带RFP红色荧光，蛋白B带GFP绿色荧光，理论上也应该能区分。
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5楼2011-10-07 17:45:00
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承诺85

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhengfan1109 at 2011-10-07 17:45:00:
LZ自己提出的这个方案呢？
蛋白有荧光，多糖没荧光可以区分，
蛋白A带RFP红色荧光，蛋白B带GFP绿色荧光，理论上也应该能区分。

谢谢！A和B都是蛋白，都具有荧光性，关键是将二者混合后，红绿荧光会交叉污染的。而且还需要带荧光处理过程不能影响蛋白A和B本身的性能。
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6楼2011-10-07 18:50:32
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承诺85

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yxwb-234 at 2011-10-07 17:07:41:
这两种蛋白是已知的吗，如果已知，可以跑电泳，或者western blot确定一下蛋白的结构，比旋度是多少，有哪些特定的氨基酸结构，即使两者混合在一起，也可以通过对不同氨基酸的标记区分开它们。如果是未知的，就不好 ...

谢谢！请问具体如何知道二者有哪些特定氨基酸结构呢。而且希望在对两种蛋白进行各种处理过程中不会对二者的结构性能破坏，不影响二者加热形成凝胶。
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7楼2011-10-07 19:43:23
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潇湘子博客

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

电泳
western blot
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我的时代还没有到来
8楼2011-10-07 20:06:42
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zj9452

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

承诺85(金币+2): 2011-10-15 21:14:19
跑个非变性电泳不就分开了……分开再看荧光不久OK了……
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9楼2011-10-13 12:03:43
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流星VS魔蝎座

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

承诺85(金币+2): 2011-10-15 21:14:25
可以跑一下聚丙烯酰胺的胶进行分离。
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10楼2011-10-15 09:57:07
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