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joyjane88铜虫 (初入文坛)
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[求助]
各位虫友，谁做过原核基因组补洞工作，本人遇到一些问题想请教一下。
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| 各位虫友，本人正在完善实验室一株细菌的基因组全图，也就是gap closure这项工作。前期的一些gaps很容易就搞定了，pcr+sequencing.现在到接近尾声的地步了，剩下几个gaps,两个sequece gaps,三四个physical gaps，尝试了多种方法都得不到PCR产物。用过的PCR方法有常规-，长距离-，多重-PCR，使用过高GC buffer，调整过引物、模板浓度和酶的用量，重新设计了引物，Takara的genome walking kit也尝试过了。是不是还有哪些方面可以改进，或者还有什么方法可以尝试？？？现在有点不知所措，望各位好心的虫友们多多给些意见和建议。 |
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