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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白纯化问题
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zhangsh0108

铜虫 (初入文坛)
★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-12-21 19:03:20
100多k就不加his或gst-tag，直接表达纯化。
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11楼2011-12-21 13:33:18
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zhengli123

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
wanhscn(金币+3): 鼓励新虫友回帖参加交流! 2011-12-22 21:04:39
挂柱可能是蛋白在折叠过程中his标签被折叠到蛋白内部，
检查一下缓冲液的成分，比方说一定不能有EDTA等
如果都不是，那建议楼主换标签吧，GST的，实在不行，就在真核生物中表达吧
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12楼2011-12-22 20:55:46
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wytwsm

银虫 (初入文坛)
★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励新虫友回帖参与交流！ 2011-12-23 09:54:42
用PET-28a的载体试试
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13楼2011-12-22 21:50:06
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edoz1986

新虫 (小有名气)
可以采用带20mm咪唑长时间孵育柱子的方法。如果你有散装镍柱的话，平衡一部分，加入到破碎上清里面，可以加搅拌子搅拌，也可以放要摇床里面摇，一般一个小时就可以了。分子量太大，可能你的标签暴露不充分。
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14楼2013-05-23 09:59:00
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