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zhangsh0108

铜虫 (初入文坛)


西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-12-21 19:03:20
100多k就不加his或gst-tag,直接表达纯化。
11楼2011-12-21 13:33:18
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zhengli123

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): 鼓励新虫友回帖参加交流! 2011-12-22 21:04:39
挂柱可能是蛋白在折叠过程中his标签被折叠到蛋白内部,
检查一下缓冲液的成分,比方说一定不能有EDTA等
如果都不是,那建议楼主换标签吧,GST的,实在不行,就在真核生物中表达吧
12楼2011-12-22 20:55:46
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wytwsm

银虫 (初入文坛)

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励新虫友回帖参与交流! 2011-12-23 09:54:42
用PET-28a的载体试试
13楼2011-12-22 21:50:06
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edoz1986

新虫 (小有名气)

可以采用带20mm咪唑长时间孵育柱子的方法。如果你有散装镍柱的话,平衡一部分,加入到破碎上清里面,可以加搅拌子搅拌,也可以放要摇床里面摇,一般一个小时就可以了。分子量太大,可能你的标签暴露不充分。
14楼2013-05-23 09:59:00
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