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求助啊，bac-to-bac表达纯化问题~~ 已有2人参与
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最近用昆虫表达系统表达纯化一个蛋白，用的细胞是sf9，P1P2P3都检测到了蛋白高表达，考染WB都检测到表达量很高，但是在纯化的时候第一步裂解，上清里就是检测不到蛋白，几乎全部都在沉淀里，换了商品用的裂解液还是无济于事，我用的lysis buffer是最常规的那种，Nacl300mM；咪唑10mM；NaH2PO4 50mM；PH 8.0；加了NP-40还是一样都在沉淀里，我的蛋白等电点6.06，所以肯定不是PH的问题，超声破碎的时候功率也不高，时间也不算长。我估计得从改buffer的配方上入手，哪位高手有经验啊，请求指点一二~~ [ 来自科研家族 Natural Products家族 ] |
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2楼2014-12-22 09:40:03
3楼2014-12-22 21:13:27
yanzhuo
无虫 (小有名气)
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- 专业: 膜生物化学与膜生物物理学
4楼2014-12-25 17:56:40
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5楼2014-12-26 11:37:00