| 查看: 1222 | 回复: 4 | ||
[求助]
求助啊，bac-to-bac表达纯化问题~~ 已有2人参与
|
|
最近用昆虫表达系统表达纯化一个蛋白，用的细胞是sf9，P1P2P3都检测到了蛋白高表达，考染WB都检测到表达量很高，但是在纯化的时候第一步裂解，上清里就是检测不到蛋白，几乎全部都在沉淀里，换了商品用的裂解液还是无济于事，我用的lysis buffer是最常规的那种，Nacl300mM；咪唑10mM；NaH2PO4 50mM；PH 8.0；加了NP-40还是一样都在沉淀里，我的蛋白等电点6.06，所以肯定不是PH的问题，超声破碎的时候功率也不高，时间也不算长。我估计得从改buffer的配方上入手，哪位高手有经验啊，请求指点一二~~ [ 来自科研家族 Natural Products家族 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
304求调剂
已经有4人回复
-
326求调剂
已经有4人回复
-
一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项
已经有4人回复
-
环境工程调剂
已经有5人回复
-
本人考085602 化学工程 专硕
已经有14人回复
-
一志愿211 0703方向310分求调剂
已经有3人回复
-
0703化学336分求调剂
已经有3人回复
-
318求调剂
已经有3人回复
-
化学工程321分求调剂
已经有9人回复
-
0703化学调剂
已经有9人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助酯的水解和酰氯的合成及纯化问题。。。（急求）
已经有45人回复
- 进行羟胺裂解后，进行蛋白的二次过亲和层析住纯化问题！！！！求助啊 ！！！
已经有9人回复
- 【求助】100BB求助三乙胺与1.5-二溴戊烷反应纯化问题
已经有5人回复
- 【求助】分离 纯化问题
已经有4人回复
- 【求助】急求~~~~~~~~~~红花总黄酮的纯化问题！！！
已经有8人回复
- 【求助】打核磁纯化问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】关于菌种分离纯化问题
已经有16人回复
- 求助苯胺的纯化问题！！
已经有8人回复
- 【求助/交流】求助蛋白纯化问题
已经有17人回复
- 【求助/交流】原核表达蛋白纯化
已经有29人回复
- 【求助】辛酸癸酸甘油酯的纯化问题
已经有11人回复
2楼2014-12-22 09:40:03
3楼2014-12-22 21:13:27
yanzhuo
无虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: -21.1
- 帖子: 93
- 在线: 25.1小时
- 虫号: 395096
- 注册: 2007-06-07
- 性别: MM
- 专业: 膜生物化学与膜生物物理学
4楼2014-12-25 17:56:40
|
本帖内容被屏蔽 |
5楼2014-12-26 11:37:00
