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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白纯化
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小丁山

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化

本人做蛋白表达纯化，没有加His-Tag，现在蛋白表达出来了，45kd，有活性，但胞外杂蛋白较多，如何纯化呢，望大家指教！
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【分子生物】EPI帖

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1楼 2011-09-21 14:59:56
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kid0i

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 说的不错 2011-09-30 07:43:17
不想反攻的话就过柱，但比较麻烦，要充分了解此蛋白质的性质！
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7楼2011-09-30 00:56:38
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imfly77

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4, MolEPI+1): 鼓励！ 2011-09-21 17:27:44
（1）还是加上Histag吧，比你找纯化方法简单多了。
（2）可以去试试离子交换色谱纯化，不过在色谱纯化之前，还得进行硫酸铵沉降之类的浓缩和粗纯化步骤，优化条件很麻烦很麻烦，纯化效果还不一定好。做得好的话，工作量都够你写一篇专门的蛋白质纯化条件优化的文章了-_-
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2楼2011-09-21 15:25:03
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小丁山

铜虫 (小有名气)
那就得倒过来重新再做转化表达了啊
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3楼2011-09-21 15:32:14
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imfly77

木虫 (小有名气)
★ ★
西瓜(金币+2): 很热心哦！ 2011-09-21 17:28:02
重做转化表达，至少实验里需要重新摸索和学习的东西少，毕竟从你的工作来讲，你的目标是为了获得纯化的目的蛋白。重新做克隆，时间也就是2周左右；
如果你现在转而去研究如何在不带Histag条件下纯化目的蛋白，就偏离了你的研究方向，而且可能做了很多工作，但结果并不理想，耽误很多时间。
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4楼2011-09-21 15:36:07
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