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小丁山

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化

本人做蛋白表达纯化,没有加His-Tag,现在蛋白表达出来了,45kd,有活性,但胞外杂蛋白较多,如何纯化呢,望大家指教!
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imfly77

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4, MolEPI+1): 鼓励! 2011-09-21 17:27:44
(1)还是加上Histag吧,比你找纯化方法简单多了。
(2)可以去试试离子交换色谱纯化,不过在色谱纯化之前,还得进行硫酸铵沉降之类的浓缩和粗纯化步骤,优化条件很麻烦很麻烦,纯化效果还不一定好。做得好的话,工作量都够你写一篇专门的蛋白质纯化条件优化的文章了-_-
2楼2011-09-21 15:25:03
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小丁山

铜虫 (小有名气)

那就得倒过来重新再做转化表达了啊
3楼2011-09-21 15:32:14
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imfly77

木虫 (小有名气)

★ ★
西瓜(金币+2): 很热心哦! 2011-09-21 17:28:02
重做转化表达,至少实验里需要重新摸索和学习的东西少,毕竟从你的工作来讲,你的目标是为了获得纯化的目的蛋白。重新做克隆,时间也就是2周左右;
如果你现在转而去研究如何在不带Histag条件下纯化目的蛋白,就偏离了你的研究方向,而且可能做了很多工作,但结果并不理想,耽误很多时间。
4楼2011-09-21 15:36:07
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辉辉集团

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

那就盐析 离子交换 分子筛都试试
5楼2011-09-21 17:03:38
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辉辉集团

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

那就盐析 离子交换 分子筛都试试
6楼2011-09-21 17:03:47
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kid0i

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 说的不错 2011-09-30 07:43:17
不想反攻的话就过柱,但比较麻烦,要充分了解此蛋白质的性质!
7楼2011-09-30 00:56:38
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