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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » HPLC中流动相的pH问题？
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yilishanshan

木虫 (正式写手)

大星星

[求助] HPLC中流动相的pH问题？

弱弱地问，HPLC中，流动相若用磷酸调pH值至4，调过了，pH到3了，怎么办？用NaOH滴加中和吗？一般多少浓度的NaOH？
HPLC实验中，流动相的pH影响大吗？
流动相中加入乙酸钠，用冰醋酸调pH；而流动相中加入磷酸二氢钾，用磷酸调pH，是要缓冲盐和对应的酸一起吗？若流动相中加入磷酸盐，是不是只能用磷酸调pH，不能用盐酸、冰醋酸？
恳请高手赐教，感激不尽！
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1楼 2011-09-20 00:07:49
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zghnlpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
karl2100(金币+1): 谢谢应助！ 2011-09-21 23:02:04
分情况
1、如果是已有方法（包括已有标准及已有明确文献），则应严格按标准方法操作，随意改动是不可取的。尤其不能加入原系统注明成分之外的其他成分。其中如果是文献的方法，建议完整重现后再尝试优化。
2、如果是新建方法则相对灵活，诸如另加加扫尾剂这些措施都是可以选择的。一般来说缓冲对还是比较考究的，如磷酸及磷酸盐，醋酸及醋酸盐，盐酸及氯化钾（美国药典），等等，这些缓冲对出来的结果往往以pH为系统评价最关键，但绝对不是只看pH。
3、缓冲对的成分，很多情况下是可以替换的。但是绝对不是没有影响，我曾经做过一些尝试，比如以钠盐替换钾盐制备缓冲系统，结果很多不可重现。当然，也有可能是我有些操作细节没有注意到，但是，与其这样引进一些不稳定因素，去查原因，还是循规蹈矩来的好。
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啊，嗷，哦，嗯
9楼2011-09-21 10:19:16
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
jiangchunyong(金币+2): 谢谢应助!欢迎常来！ 2011-09-20 08:36:49
yilishanshan(金币+5): 谢谢，若P 2011-09-27 19:33:15
pH影响的大小，主要取决于样品酸碱性。样品中性，基本没啥影响，样品酸碱性，对保留时间影响较大，流动相pH在样品pKa正负1范围内变化，保留时间变化最大。

酸盐以对应的酸调pH，能形成较稳定的pH缓冲体系，若流动相有蒸发沉淀等变化，不至于流动相pH变化太大而造成保留时间发生变化。当然，以磷酸盐为例，若以盐酸、醋酸等调pH，亦未尝不可。

返调pH 的问题。理论上，是可以的。引入少量的盐，一般不会对峰型等造成加大的影响。浓度，随意。
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守候在风中的宁静。
2楼2011-09-20 08:26:26
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xiaoxiazizx

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
novus(金币+1): 谢谢交流，欢迎常来药学版！ 2011-09-20 18:58:27
最好重新另配缓冲液，因为流动相最好不要含有过多盐的成分，对柱子损伤很大。而且柱子的pH使用范围是一定的。流动相中加入磷酸盐，最好用磷酸调啊，否则引入其他的杂质
赞一下(2人) 回复此楼
刻意去找的东西，往往是找不到的。天下万物的来和去，都有他的时间。
3楼2011-09-20 09:51:29
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lxh729

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
jiangchunyong(金币+1): 谢谢应助!欢迎常来！ 2011-09-20 16:52:20
HPLC中，流动相若用磷酸调pH值至4，调过了，pH到3，若是对浓度要求不是很严格，且现在的浓度还不是很大，可用磷酸氢二钾或磷酸氢二钠调，一般不用氢氧化钠来调，最好让水相形成缓冲盐。
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4楼2011-09-20 11:22:00
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