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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)

对了,是不是这样,由于引物是特异性的,那在后代中,转成功的会p出条带,没成功的,由于引物的特异性,导致小鼠就是有相似的目的基因,用特异性引物也p不出条带来!是不是这么个道理啊,大虾
心,是用来使用的,不能搁浅!
11楼2011-09-07 12:49:55
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huguangdong

至尊木虫 (职业作家)

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10楼: Originally posted by XI4ZHL at 2011-09-07 10:57:10:
是啊,我只是验证一下以前师姐构建的载体,别的还没开始,先把能想到的问题想清楚了,再做。你说的稳定表达,RT-PCR我都知道,关键是,我设计的引物是基因全长的,,那我用pcr检测时,克隆出来的是基因全长,那C ...

看你说的核心内容就是CMV的检测,好办,如果整合进去并能稳定表达那就提取基因组DNA直接做PCR检测或者设计探针做southern检测CMV,如果是转基因的小鼠这两种方法只要做好都会出来结果,当然PCR的引物按照CMV的序列来设计,没必要是全场,200-300BP长度就可以。
12楼2011-09-07 17:00:47
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by huguangdong at 2011-09-07 17:00:47:
看你说的核心内容就是CMV的检测,好办,如果整合进去并能稳定表达那就提取基因组DNA直接做PCR检测或者设计探针做southern检测CMV,如果是转基因的小鼠这两种方法只要做好都会出来结果,当然PCR的引物按照CMV的序 ...

好的,知道,谢谢大虾,希望以后有问题再请教您,非常感谢!!!
心,是用来使用的,不能搁浅!
13楼2011-09-07 20:07:23
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

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8楼: Originally posted by XI4ZHL at 2011-09-07 09:27:02:
那CMV用pcr检测,使用通用的测序引物检测,还是自己设计的目的基因的引物检测,谢谢

自己拿到载体上CMV的序列,自己设引物扩下就行了,通用引物一般在酶切位点附近吧,所以应该自己设
14楼2011-09-08 08:17:10
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 世外清风 at 2011-09-08 08:17:10:
自己拿到载体上CMV的序列,自己设引物扩下就行了,通用引物一般在酶切位点附近吧,所以应该自己设

好的,谢谢大虾!
心,是用来使用的,不能搁浅!
15楼2011-09-08 17:38:05
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 世外清风 at 2011-09-08 08:17:10:
自己拿到载体上CMV的序列,自己设引物扩下就行了,通用引物一般在酶切位点附近吧,所以应该自己设

大虾,再问你一下吧,能用pEGFP-N1表达载体做转基因吗,能转活体吗?这些表达载体怎么选比较好啊?大虾!谢谢
心,是用来使用的,不能搁浅!
16楼2011-09-19 14:17:27
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

这是可以的。
17楼2011-09-19 14:52:25
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 世外清风 at 2011-09-07 08:25:59:
先要设计好是应该的

大虾,还想请教你几个问题,我的载体构建完了,用pEGFP-N1构建的,下一步要养细胞了,不知道选什么细胞好,你给提点意见吧,谢谢,我在分子生物学板块里提问了,你可以去哪里给我解答,我可以给你金币,谢谢大虾 我们实验室有C2C12 和3T3-L1 都是老鼠的,这两个行吗?
心,是用来使用的,不能搁浅!
18楼2011-10-16 10:59:21
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