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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 转基因问题
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)
对了，是不是这样，由于引物是特异性的，那在后代中，转成功的会p出条带，没成功的，由于引物的特异性，导致小鼠就是有相似的目的基因，用特异性引物也p不出条带来！是不是这么个道理啊，大虾
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心，是用来使用的，不能搁浅！
11楼2011-09-07 12:49:55
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huguangdong

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
10楼: Originally posted by XI4ZHL at 2011-09-07 10:57:10:
是啊，我只是验证一下以前师姐构建的载体，别的还没开始，先把能想到的问题想清楚了，再做。你说的稳定表达，RT-PCR我都知道，关键是，我设计的引物是基因全长的，，那我用pcr检测时，克隆出来的是基因全长，那C ...

看你说的核心内容就是CMV的检测，好办，如果整合进去并能稳定表达那就提取基因组DNA直接做PCR检测或者设计探针做southern检测CMV，如果是转基因的小鼠这两种方法只要做好都会出来结果，当然PCR的引物按照CMV的序列来设计，没必要是全场，200-300BP长度就可以。
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12楼2011-09-07 17:00:47
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by huguangdong at 2011-09-07 17:00:47:
看你说的核心内容就是CMV的检测，好办，如果整合进去并能稳定表达那就提取基因组DNA直接做PCR检测或者设计探针做southern检测CMV，如果是转基因的小鼠这两种方法只要做好都会出来结果，当然PCR的引物按照CMV的序 ...

好的，知道，谢谢大虾，希望以后有问题再请教您，非常感谢！！！
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13楼2011-09-07 20:07:23
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
8楼: Originally posted by XI4ZHL at 2011-09-07 09:27:02:
那CMV用pcr检测，使用通用的测序引物检测，还是自己设计的目的基因的引物检测，谢谢

自己拿到载体上CMV的序列，自己设引物扩下就行了，通用引物一般在酶切位点附近吧，所以应该自己设
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14楼2011-09-08 08:17:10
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 世外清风 at 2011-09-08 08:17:10:
自己拿到载体上CMV的序列，自己设引物扩下就行了，通用引物一般在酶切位点附近吧，所以应该自己设

好的，谢谢大虾！
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15楼2011-09-08 17:38:05
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 世外清风 at 2011-09-08 08:17:10:
自己拿到载体上CMV的序列，自己设引物扩下就行了，通用引物一般在酶切位点附近吧，所以应该自己设

大虾，再问你一下吧，能用pEGFP-N1表达载体做转基因吗，能转活体吗？这些表达载体怎么选比较好啊？大虾！谢谢
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16楼2011-09-19 14:17:27
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)
这是可以的。
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17楼2011-09-19 14:52:25
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 世外清风 at 2011-09-07 08:25:59:
先要设计好是应该的

大虾，还想请教你几个问题，我的载体构建完了，用pEGFP-N1构建的，下一步要养细胞了，不知道选什么细胞好，你给提点意见吧，谢谢，我在分子生物学板块里提问了，你可以去哪里给我解答，我可以给你金币，谢谢大虾 我们实验室有C2C12 和3T3-L1 都是老鼠的，这两个行吗？
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18楼2011-10-16 10:59:21
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