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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)

[求助] 转基因问题

各位大虾,我想做转基因,可是我转的基因在小鼠中本来就有,我应该如何确定后代中有没有转成功?是原来的,还是我转进去的??求各位大虾帮忙,不胜感激!!
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心,是用来使用的,不能搁浅!
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huguangdong

至尊木虫 (职业作家)

你这都还没开始做啊,转基因肯定是要用启动子的,不管是CMV还是特异性启动子。至于最终确定是否转基因动物,首先要在细胞水平验证,筛选出单克隆做个RT-PCR看看,有条件可以做做SOUTHERN,然后转完生下小鼠再重复这些检测,当然你也可以做做FISH和反向PCR来看整合位点。这其实是一个复杂的过程,做好完整的转基因动物检测就是一篇博士论文。常用的手段  PCR、southern、FISH、反向PCR.就算后面两个不做,前两个也要做一做。
9楼2011-09-07 10:00:37
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

XI4ZHL(金币+2): 谢谢你 2011-09-07 08:14:45
启动子什么的特异吗?或看看里面有没有其他一段和基因组内不同的序列进行扩增即可。
2楼2011-09-06 08:13:56
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 世外清风 at 2011-09-06 08:13:56:
启动子什么的特异吗?或看看里面有没有其他一段和基因组内不同的序列进行扩增即可。

我不用启动子,直接用基因序列cds区做可以吗?基因和小鼠的同源性很高,我把质粒上加上荧光蛋白再转可以吗?这样可以检测后代中是否有光蛋白,有的说明转成功,再做这个基因的定量可以吗??大虾,希望达到你的帮助,谢谢!
心,是用来使用的,不能搁浅!
3楼2011-09-06 08:37:42
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

没启动子当然不行了.根本启动不了...你是连到什么载体上,是不是载体上已经有CMV启动子了,你扩一段载体上的序列应该也可以吧,之后做做定量看看有没有过表达是可以的
4楼2011-09-06 14:09:03
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