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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)

[求助] 转基因问题

各位大虾，我想做转基因，可是我转的基因在小鼠中本来就有，我应该如何确定后代中有没有转成功？是原来的，还是我转进去的？？求各位大虾帮忙，不胜感激！！
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心，是用来使用的，不能搁浅！
1楼 2011-09-04 16:11:13
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 世外清风 at 2011-09-06 08:13:56:
启动子什么的特异吗？或看看里面有没有其他一段和基因组内不同的序列进行扩增即可。

我不用启动子，直接用基因序列cds区做可以吗？基因和小鼠的同源性很高，我把质粒上加上荧光蛋白再转可以吗？这样可以检测后代中是否有光蛋白，有的说明转成功，再做这个基因的定量可以吗？？大虾，希望达到你的帮助，谢谢！
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心，是用来使用的，不能搁浅！
3楼2011-09-06 08:37:42
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

XI4ZHL(金币+2): 谢谢你 2011-09-07 08:14:45
启动子什么的特异吗？或看看里面有没有其他一段和基因组内不同的序列进行扩增即可。
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2楼2011-09-06 08:13:56
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

没启动子当然不行了.根本启动不了...你是连到什么载体上，是不是载体上已经有CMV启动子了，你扩一段载体上的序列应该也可以吧，之后做做定量看看有没有过表达是可以的
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4楼2011-09-06 14:09:03
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 世外清风 at 2011-09-06 14:09:03:
没启动子当然不行了.根本启动不了...你是连到什么载体上，是不是载体上已经有CMV启动子了，你扩一段载体上的序列应该也可以吧，之后做做定量看看有没有过表达是可以的

我还没开始，万一思路错了，就都白干！载体还没选好，我想选一个带荧光蛋白的载体重新构建，以前师姐构建了一个载体pcDNA3.1，上边有pCMV，下游是目的基因，我不知能用吗。我现在不明白的关键问题是，转完之后，在小鼠后代中，不可能所有的都转成功（想用打点注射），我现在弄不明白，如何鉴定后代中那个是有目的基因，哪些后代是正常小鼠，如果我用带荧光蛋白的载体，是不是可以检测一下后代的荧光蛋白，从而区分哪些有目的基因，哪些没有，大虾，你看可以吗？谢谢大虾，我是新手，不懂请大虾给指点一下！谢谢
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心，是用来使用的，不能搁浅！
5楼2011-09-07 08:14:15
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