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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 转基因问题
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)

[求助] 转基因问题

各位大虾，我想做转基因，可是我转的基因在小鼠中本来就有，我应该如何确定后代中有没有转成功？是原来的，还是我转进去的？？求各位大虾帮忙，不胜感激！！
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心，是用来使用的，不能搁浅！
1楼 2011-09-04 16:11:13
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)
其实有没有荧光无所谓，有荧光的话可能更直观点，有没有成功转入直接用PCR就可以了，pc3.1可以的，因为在老鼠基因组内是没有CMV的，CMV和你的目的基因是连在一起的，PCR检测到CMV转入了，就可以判定你外源的目的基因也转入了，一般在PCR成阳性后，一般要进一步用Southern验证的，如也为阳性那么基本就可以判定了。当然你是不是完整的整合进入也可以用PCR和Southern检测出来.但转入了并不一定表达，因为基因组内部很复杂，这就要看你的人品了，做个定量看看mRNA水平上有没有过表达，可以初步判定一下。
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6楼2011-09-07 08:25:32
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

XI4ZHL(金币+2): 谢谢你 2011-09-07 08:14:45
启动子什么的特异吗？或看看里面有没有其他一段和基因组内不同的序列进行扩增即可。
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2楼2011-09-06 08:13:56
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 世外清风 at 2011-09-06 08:13:56:
启动子什么的特异吗？或看看里面有没有其他一段和基因组内不同的序列进行扩增即可。

我不用启动子，直接用基因序列cds区做可以吗？基因和小鼠的同源性很高，我把质粒上加上荧光蛋白再转可以吗？这样可以检测后代中是否有光蛋白，有的说明转成功，再做这个基因的定量可以吗？？大虾，希望达到你的帮助，谢谢！
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心，是用来使用的，不能搁浅！
3楼2011-09-06 08:37:42
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

没启动子当然不行了.根本启动不了...你是连到什么载体上，是不是载体上已经有CMV启动子了，你扩一段载体上的序列应该也可以吧，之后做做定量看看有没有过表达是可以的
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4楼2011-09-06 14:09:03
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