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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)

[求助] 转基因问题

各位大虾,我想做转基因,可是我转的基因在小鼠中本来就有,我应该如何确定后代中有没有转成功?是原来的,还是我转进去的??求各位大虾帮忙,不胜感激!!
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心,是用来使用的,不能搁浅!
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by huguangdong at 2011-09-07 10:00:37:
你这都还没开始做啊,转基因肯定是要用启动子的,不管是CMV还是特异性启动子。至于最终确定是否转基因动物,首先要在细胞水平验证,筛选出单克隆做个RT-PCR看看,有条件可以做做SOUTHERN,然后转完生下小鼠再重复 ...

是啊,我只是验证一下以前师姐构建的载体,别的还没开始,先把能想到的问题想清楚了,再做。你说的稳定表达,RT-PCR我都知道,关键是,我设计的引物是基因全长的,,那我用pcr检测时,克隆出来的是基因全长,那CMV启动子怎么确定有,关键是转到小鼠之后,小鼠中本来也有和目的基因相同的基因,所以在小鼠后代中,怎么检测cmv启动子的存在,这个有了,才能确定转基因成功,再做定量之类的进行比较,我是新手,刚开始,还要麻烦你,谢谢(我的关键问题是如何在后代中确定那个是转成功的,那个是没有啊,你说cmv小鼠中没有,那我想检测到cmv不就说明成功了,那就是要检测cmv了,那cmv怎么检测)谢谢,有点罗嗦,见谅了大虾!!
心,是用来使用的,不能搁浅!
10楼2011-09-07 10:57:10
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

XI4ZHL(金币+2): 谢谢你 2011-09-07 08:14:45
启动子什么的特异吗?或看看里面有没有其他一段和基因组内不同的序列进行扩增即可。
2楼2011-09-06 08:13:56
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 世外清风 at 2011-09-06 08:13:56:
启动子什么的特异吗?或看看里面有没有其他一段和基因组内不同的序列进行扩增即可。

我不用启动子,直接用基因序列cds区做可以吗?基因和小鼠的同源性很高,我把质粒上加上荧光蛋白再转可以吗?这样可以检测后代中是否有光蛋白,有的说明转成功,再做这个基因的定量可以吗??大虾,希望达到你的帮助,谢谢!
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3楼2011-09-06 08:37:42
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

没启动子当然不行了.根本启动不了...你是连到什么载体上,是不是载体上已经有CMV启动子了,你扩一段载体上的序列应该也可以吧,之后做做定量看看有没有过表达是可以的
4楼2011-09-06 14:09:03
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