RNA提取 - 生物科学 - 第3页小木虫论坛-学术科研互动平台

21楼2011-09-06 12:47:31

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gloryping

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19楼: Originally posted by shengwufenzi at 2011-09-06 10:30:29:
原因一：显示多于3条带的原因是由于细胞内还有线粒体，这个细胞器中含有少量的RNA 。如果用LiCl沉淀，有可能不会出现这么多而只会出现2条带：18S、28S。因为LiCl只沉淀大分子RNA
原因二：RNA在生物体的表达本来就 ...

学到了很多知识，谢谢！

22楼2011-09-06 12:48:23

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gloryping

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20楼: Originally posted by wchuangqi at 2011-09-06 12:04:26:
有蛋白污染，RNA有降解。提取过程最好快些，氯仿提蛋白以后，吸取上清的时候最好少吸一些

(⊙v⊙)嗯，第一次提取没有经验，以后会注意您所说的问题，谢谢！

23楼2011-09-06 12:49:18

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yidaqunyan

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8楼: Originally posted by gloryping at 2011-09-05 09:27:54:
我是用trizol提取的，下一步打算先逆转成cDNA，然后做定量PCR，不知道会不会有影响。

有影响的，特别是DNA污染
可以过程中多抽提几次，也可能是你技术不熟练的原因。。。
第一次提成这样已经很好了

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gloryping

不孝有三，读博为大！

24楼2011-09-06 14:03:45

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gloryping

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24楼: Originally posted by yidaqunyan at 2011-09-06 14:03:45:
有影响的，特别是DNA污染
可以过程中多抽提几次，也可能是你技术不熟练的原因。。。
第一次提成这样已经很好了

谢谢建议！

25楼2011-09-06 14:15:23

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njauzx

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按照你的marker，应该是1k的marker吧。28s两千多，18s一千多，5s五六百。下面的很亮的数十nt的小带应该是tRNA。这几条带都是正常的。你的RNA 28s和18s比例很好，应该没有降解，质量还是不错的。上面存在一些大的杂带是真的，可能是DNA，对于Realtime 实验有很大影响，应想办法处理，如DNAseI消化。

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gloryping

26楼2011-09-06 15:12:51

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gloryping

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26楼: Originally posted by njauzx at 2011-09-06 15:12:51:
按照你的marker，应该是1k的marker吧。28s两千多，18s一千多，5s五六百。下面的很亮的数十nt的小带应该是tRNA。这几条带都是正常的。你的RNA 28s和18s比例很好，应该没有降解，质量还是不错的。上面存在一些大的杂 ...

其实用的是20bp的marker，第一次提取，不是特别理想，实验技术方面有待加强，谢谢交流！

27楼2011-09-06 15:16:37

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rb

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如果你做定量PCR的时候引物设计没有跨外显子，那么需要用DNase处理后，乙醇沉淀。如果引物设计合理，不需要任何特殊处理，放心的去玩：）

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gloryping

寝室楼的大爷、大妈都是哲学家，他们每天都在思考人类最根本的三个问题：你是谁？你从哪儿来？要去哪儿？

28楼2011-09-06 15:30:04

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gloryping

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28楼: Originally posted by rb at 2011-09-06 15:30:04:
如果你做定量PCR的时候引物设计没有跨外显子，那么需要用DNase处理后，乙醇沉淀。如果引物设计合理，不需要任何特殊处理，放心的去玩：）

O(∩_∩)O谢谢您的建议，我先做做试试，就当个预实验吧，不行的话再摸索摸索条件，反正才第一次做，只求把流程弄熟练，呵呵

29楼2011-09-06 16:54:42

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lh_1025

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对于第一次提取RNA的新人来讲，整体上效果不错。下次注意把枪头什么的要好好浸泡，消除Rnase的污染，还有就是研磨的时候尽量要保持低温，时刻保持有液氮，这样应该会好一点