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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

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[交流] 求助土壤基因组 PCR 扩增问题已有15人参与

跟很多人一样做的是土壤微生物多样性
这里，我觉得有一个很大的瓶颈就是提取基因组之后的PCR扩增问题。因为后面的所有分子水平的分析都建立在PCR 扩增的基础上。可是我做了很久，这个扩增效果总是不理想。
在此发帖，希望做类似工作的能够将自己在实验过程中的心得一一列举出来不论什么因素只要是自己觉得影响pCR 效果的都列举出来吧，毕竟经验这东西还是很重要的希望大家不吝赐教，我们一相互讨论。

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1楼 2011-08-29 20:35:13

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bear0329

金虫 (正式写手)

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★
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引用回帖:

19楼: Originally posted by 老夏853 at 2011-09-04 18:22:48:
很有道理。目前我们用但是是溶菌酶。但是我怀疑溶菌酶在这种复杂条件下的效率何如？听说sigma 有一种细胞壁崩溃酶我去这个名字~~ 我用同学用来做霉菌感受态，据说去壁效果不错想用来试试

确实，要做土壤的总DNA,破壁很重要，针对不同微生物的细胞壁特点进行，溶菌酶对细菌有效，而对真菌就没什么效果了，就要加像纤维素酶、蜗牛酶等破真菌细胞壁的酶。还有就是物理机械破壁和化学破壁相结合。