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空谷幽风

金虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 很好很强大！我都没有发挥的机会了…… 2011-08-29 17:51:41

引用回帖:

3楼: Originally posted by 飞翔的诗人 at 2011-08-29 14:56:14:
谢谢你的回复，有几个问题再问下，首先是为什么要加上4－5个保护碱基，还有加入DMSO起了什么作用，每个循环降0.2是指退火温度降0.2度吗？

1.因为限制性内切酶要发生酶切的前提是先结合在酶切位点上，不同的限制性内切酶结合的碱基数不一样，最少的是在识别位点的两端要多出一个碱基，有的要多出好几个；再加上PCR得到的片段两端很容易丢失碱基，所以，对于一般的限制性内切酶来说添加4-6个保护碱基是比较保险的，否则可能会导致无法发生酶切
2.DMSO可以使双链在稍低的温度下（相比较不加DMSO而言）发生解离。
3.是指退火温度