| 查看: 4944 | 回复: 16 | ||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
1.5kb的 PCR目的序列GC含量高达67%，引物Tm值达90℃，怎么P比较好？
|
||
|
本人根据目的序列的CDS区设计出引物，由于目的序列本身GC含量达67%，设计出的引物GC含量也超过了60%，oligo给出的两条引物的Tm值均在90℃左右，其推荐的退火温度为68.4℃（最高72度）， 上游 5'-tcGAATTCatgtcccagc ccgacgccac cccgtt-3' (EcoR I酶切位点) 下游 5'-tctAAGCTTtcaggctccg gcccggttga ggacg-3'（Hind III酶切位点） oligo最后给引物的PCR评价没问题，不过这么高的GC含量，该怎么P比较好？如果是用带GC缓冲液的Taq酶，梯度PCR反应条件该如何设计？ |
回复此楼» 本帖已获得的红花（最新10朵）
飞翔的诗人» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有130人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
yangjianchen
铜虫 (小有名气)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 1402.5
- 散金: 25
- 红花: 3
- 帖子: 147
- 在线: 74.7小时
- 虫号: 1217206
- 注册: 2011-03-01
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
17楼2013-05-28 15:20:18
空谷幽风
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 32
- 应助: 13 (小学生)
- 贵宾: 0.05
- 金币: 1106.1
- 散金: 500
- 红花: 13
- 帖子: 615
- 在线: 116.5小时
- 虫号: 714271
- 注册: 2009-03-04
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2011-08-29 13:19:19
3楼2011-08-29 14:56:14
blackrose8089
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 16
- 应助: 100 (初中生)
- 贵宾: 0.11
- 金币: 10643.1
- 散金: 155
- 红花: 30
- 沙发: 6
- 帖子: 3706
- 在线: 791.4小时
- 虫号: 614948
- 注册: 2008-09-28
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
4楼2011-08-29 14:58:08
25