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1.5kb的 PCR目的序列GC含量高达67%，引物Tm值达90℃，怎么P比较好？
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本人根据目的序列的CDS区设计出引物，由于目的序列本身GC含量达67%，设计出的引物GC含量也超过了60%，oligo给出的两条引物的Tm值均在90℃左右，其推荐的退火温度为68.4℃（最高72度）， 上游 5'-tcGAATTCatgtcccagc ccgacgccac cccgtt-3' (EcoR I酶切位点) 下游 5'-tctAAGCTTtcaggctccg gcccggttga ggacg-3'（Hind III酶切位点） oligo最后给引物的PCR评价没问题，不过这么高的GC含量，该怎么P比较好？如果是用带GC缓冲液的Taq酶，梯度PCR反应条件该如何设计？ |
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