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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白酶基因表达，用的Bacillus subtilis系统，但总是表达不出，求高人指点……
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kaikai

新虫 (初入文坛)
★ ★
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西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-04 22:25:45
引用回帖:
9楼: Originally posted by Ag6501 at 2011-11-12 18:24:42:
加了前肽是有活性的，因为我要表达的蛋白酶原宿主就是革兰氏阴性菌，所以在大肠杆菌中活性非常高，而在枯草中，活性也有，但很低

楼主，pHT43载体是诱导型的启动子么？分泌到胞外啊？
还有前肽序列楼主是怎么选的？是不是表达蛋白最好加上呢？
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11楼2011-11-23 09:51:38
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zx6291

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
群里的兄弟姐妹们，求好心人帮助，是否可以提供枯草宿主菌株和pHT43载体或类似穿梭载体？谢谢！QQ：21743198；EMAiL：zhangxian@desano.com
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12楼2012-03-09 15:12:33
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yyongl-168

木虫 (正式写手)
★
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楼主，能否提供一份WB800N菌株和pHT43载体给我？当然我们也可以互换的，我手头有下列质粒和菌株，
大肠杆菌表达系统：
质粒：pET3a，pET28a，pET30a，pET32a，pGEX－4T－1；菌株：BL21(DE3)，Rostta
酵母表达系统：
质粒：pPIC9K，pYES2；菌株：GS115，INVSc1
乳酸菌表达系统：
质粒：pIL253，pLEM415，pJIM1715，pMG36e；菌株：MG136
酵母基因敲除系统：
质粒：pRS426，pCSN44；菌株：FY834
乳酸菌基因敲除系统：
质粒：pFED760，pJC159
植物表达质粒（GATEWAY系统）：
质粒：pK2GW7，pKGWFS7，pENTR-2B
丝状真菌相关质粒：
基因定位质粒：pANGH3；基因敲除质粒：pPK2，pFG1，pMD18T-bar；启动子功能分析质粒：pSJ3，pSJ4
酵母双杂交系统:
质粒pGADT7，pGBKT7；菌株：AH109
如果可以交换，请联系我。QQ:39113616；email: yyongl-168@163.com
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13楼2012-05-04 21:48:01
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
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除了载体和菌生理条件问题，考虑有表达的条件和你的检测蛋白质的方法（是否检测出来了？），表达产物是不是被降解了或者失活了？启动子是不是够强？开放阅读框是否发生了移码？终止子设定了吗？
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14楼2012-05-18 12:30:24
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1002330754

新虫 (初入文坛)
★
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求助，不知道能否将WB800N以及pht43给份我。。交换也行的，1002330754@qq.com
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15楼2013-07-11 11:26:15
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super龙2014

新虫 (初入文坛)
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想问一下楼主！pht43酶切位点用的什么？我目前用BamHi 和xba i怎么也连不上去？是不是和酶切位点太靠近有关？能不能给点儿建议。谢
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16楼2013-10-20 10:38:06
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yemayd

新虫 (初入文坛)
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枯草的表达系统 需要加IPTG么，好像不需要吧。还有你没有加抗性。
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17楼2014-04-16 15:22:49
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pullulanase

新虫 (初入文坛)
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引用回帖:
5楼: Originally posted by Ag6501 at 2011-11-08 11:07:30
在枯草里表达出了，只是活性比较低，100多个单位，是加了个前肽，结果就表达了。...

请问楼主：你说的前肽是不是原来基因的信号肽，你在枯草芽孢杆菌WB800中表达的基因是去了信号肽的成熟蛋白吗？
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18楼2014-06-18 15:12:21
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冯英慧1101

新虫 (初入文坛)
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你好，请问pht43载体你是保存在什么菌株里的？
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19楼2014-07-17 08:37:16
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冯英慧1101

新虫 (初入文坛)
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楼主wb800n能不能赠送个？
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20楼2014-08-23 15:34:03
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