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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌液PCR问题
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madengyu

禁虫 (小有名气)
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1楼 2011-08-26 09:35:00
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guojianping

木虫 (正式写手)
★
西瓜(金币+1): 大批量筛的时候还是PCR方便呢，可以先用PCR筛出一部分，再用酶切验证这拼candidate。 2011-08-26 17:44:17
菌液PCR很多时候不靠谱，还是提取质粒在P试试看吧，酶切严格验证就好了
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13楼2011-08-26 15:33:10
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shuihaizi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我认为你的模板量太大了 ，我做10ul体系的，过夜摇菌，只用0.2ul足够了，效果挺好的。
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2楼2011-08-26 09:50:25
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

你做菌液PCR是想干什么？扩载体上的一段序列还是什么？
还是做克隆验证呢？
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-08-26 10:24:49
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xbl3688

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你的胶图中连一点抹带都没有，Marker后面三孔最下端隐约还能看到引物二聚体的影子，我怀疑是模板有问题，就是说假阳性或者摇的菌出了问题（有沉淀，一般刚摇完的菌是没有沉淀的）。
    下次做菌液pcr的时候最好拿个已知的目的基因做个正对照，这样就可以排除pcr体系和程序的问题，因为菌液pcr影响因素蛮多的。
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生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美
5楼2011-08-26 10:42:48
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