应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 请教各位前辈 为什么我做菌落PCR总也P不出来
292/3返回列表上一页123下一页
查看: 5431  |  回复: 28
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MicEPI ，点击这里进行查看

yguang

木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
肯定跟菌的多少没关系，还是找体系里其他东西的原因吧！
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2011-08-25 20:24:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

带刀猎人

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by xt123xt at 2011-08-25 18:37:57:
预变性时间弄成10分钟

同学请不要搞笑！
回复此楼
12楼2011-08-25 22:54:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xintutiao

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wqj1988926 at 2011-08-24 08:45:45:
只是蘸取是不行的，要确定体系里有足量的菌，我最近刚做过，发现如果菌少的话也是做不出来的，还有最好在原有预变性温度下增加1分钟，利于细胞裂解，最后电泳检测之前，10000rpm离心五分钟，使菌的裂解碎片完全沉 ...

请教您一下，如果菌的碎片在电泳中一起前进的话，那它在EB染后 紫外灯的照射下能显色吗？具体的干扰是什么呢？谢谢您了
赞一下 回复此楼
13楼2011-08-26 10:16:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wqj1988926

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
因为菌裂解后有些蛋白就进入体系而蛋白在紫外下也是显色的，故而会有影响，会看到一长条亮的，可能就遮盖住你的目的片段了。碎片的话也可能存在一些莫名奇妙的现象。
赞一下(1人) 回复此楼
风雪夜归人
14楼2011-08-26 10:30:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tcguobing

银虫 (初入文坛)
不行就做菌液PCR
赞一下 回复此楼
15楼2011-08-26 18:34:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

忽必烈
16楼2011-08-26 18:41:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

忽必烈
17楼2011-08-26 18:42:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianlei1985

铜虫 (小有名气)
我都是用摇完菌后，用菌液做PCR，效果比菌落好，而且简单，10UL体系中加0.5UL菌液即可
赞一下(2人) 回复此楼
坚持自己的梦想，加油
18楼2011-08-26 18:57:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xintutiao

金虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by wqj1988926 at 2011-08-26 10:30:38:
因为菌裂解后有些蛋白就进入体系而蛋白在紫外下也是显色的，故而会有影响，会看到一长条亮的，可能就遮盖住你的目的片段了。碎片的话也可能存在一些莫名奇妙的现象。

哦 这样啊 太感谢啦 谢谢谢谢
赞一下 回复此楼
19楼2011-08-27 09:18:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xintutiao

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gwbk at 2011-08-23 23:40:57:
体系是她给你的，她如果能做出来，你就肯定也能。菌量太多可能做不出来~~~蘸几下是一个很笼统的概念。我一般挑16-20h左右的中等面积菌落（质粒多拷贝），溶解到预备好的PCR管10ul无菌水中，混匀抽1-3ul做50ul体系 ...

请教这位前辈，我做完转化后，挑了蓝白筛选中的单个白斑，做菌落PCR，为什么只有引物二聚体，其他都没有呢，marker很明显，我用的是大肠杆菌DH5α感受态，这不是应该很容易P出来吗？

[ Last edited by xintutiao on 2011-8-27 at 16:15 ]
赞一下 回复此楼
20楼2011-08-27 16:13:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xintutiao 的主题更新
292/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +3 暗涌afhb 2026-03-16 3/150 2026-03-20 00:28 by 河南大学校友
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 0856调剂，是学校就去 +6 sllhht 2026-03-19 7/350 2026-03-19 19:50 by 制度的
[考研] 材料与化工求调剂 +7 为学666 2026-03-16 7/350 2026-03-19 14:48 by 尽舜尧1
[考研] 317求调剂 +3 申子申申 2026-03-19 6/300 2026-03-19 14:16 by 申子申申
[考研] 346求调剂[0856] +3 WayneLim327 2026-03-16 6/300 2026-03-19 11:21 by WayneLim327
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +10 Liwangman 2026-03-15 10/500 2026-03-19 10:25 by 无际的草原
[教师之家] 焦虑 +9 水冰月月野兔 2026-03-13 13/650 2026-03-19 09:50 by otani
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +4 守候夕阳CF 2026-03-18 4/200 2026-03-18 22:16 by li123456789.
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-18 4/200 2026-03-18 21:47 by 尽舜尧1
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
[考研] 278求调剂 +5 烟火先于春 2026-03-17 5/250 2026-03-18 08:43 by 星空星月
[考研] 材料专硕326求调剂 +6 墨煜姒莘 2026-03-15 7/350 2026-03-17 17:10 by ruiyingmiao
[考研] 302求调剂 +4 小贾同学123 2026-03-15 8/400 2026-03-17 10:33 by 小贾同学123
[考研] 11408 一志愿西电，277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭