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beiju

铜虫 (初入文坛)


[交流] 蛋白层析

蛋白层析前需要用相应的缓冲液透析吗?
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beiju

铜虫 (初入文坛)


用tris-HCl洗脱杂蛋白时为什么会连续出现两个峰   亲和层析
2楼2011-08-21 14:50:43
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jackie_jang

金虫 (正式写手)



beiju(金币+1):谢谢参与
是的,可以除盐,还有就是能和层析时,缓冲液系统一样。
3楼2011-08-21 15:22:56
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zhu-hongwen

至尊木虫 (知名作家)



beiju(金币+1):谢谢参与
??
4楼2011-08-21 16:38:09
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beiju(金币+1):谢谢参与
层析有多种,各自要求的样品条件不一样,有的对样品体积还有要求,所以不可一概而论,总结起来就是

离子交换层析柱:蛋白质样品要求低盐(绝对要透析除盐!)利于吸附,用离子强度来梯度解吸附,依照吸附力不同而分离(也有用pH梯度,分离原理同),不注重要求样品体积,只注重蛋白质吸附量。附阴、阳离子层析柱说明书见附件。

疏水层析:蛋白质样品要求高盐吸附(绝对不可以透析除盐!),低盐洗脱解吸附,不要求样品体积,只注重蛋白质吸附量。说明书见附件。

分子排阻:对蛋白质样品的盐浓度毫无要求!但是不可以透析,因为希望样品的体积越小越好,一般最好不超过层析柱体积的1%。说明书见附件。

亲和层析:依照各种原理而成,但是层析柱条件不同,是否要求盐浓度还要看层析柱。
5楼2011-08-21 21:02:33
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★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+7, BioEPI+1): good! 2011-08-21 21:09:56
beiju(金币+5): 谢谢 应该会有帮助 2011-08-22 16:10:25
引用回帖:
5楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-08-21 21:02:33:
层析有多种,各自要求的样品条件不一样,有的对样品体积还有要求,所以不可一概而论,总结起来就是

离子交换层析柱:蛋白质样品要求低盐(绝对要透析除盐!)利于吸附,用离子强度来梯度解吸附,依照吸附力不同 ...

层析有多种,各自要求的样品条件不一样,有的对样品体积还有要求,所以不可一概而论,总结起来就是

离子交换层析柱:蛋白质样品要求低盐(绝对要透析除盐!)利于吸附,用离子强度来梯度解吸附,依照吸附力不同而分离(也有用pH梯度,分离原理同),不注重要求样品体积,只注重蛋白质吸附量。附阴、阳离子层析柱说明书见附件。强阳HiPrep 16 10 SP XL              强阴HiPrep 16 10 Q XL

疏水层析:蛋白质样品要求高盐吸附(绝对不可以透析除盐!),低盐洗脱解吸附,不要求样品体积,只注重蛋白质吸附量。说明书见附件。HiPrep 16 10 Phenyl FF (high sub).

分子排阻:对蛋白质样品的盐浓度毫无要求!但是不可以透析,因为希望样品的体积越小越好,一般最好不超过层析柱体积的1%。说明书见附件。GE SuperdexTM 75

所有附上的说明书都只是该类中的一种而已,起个代表性,普及知识。亲和层析:依照各种原理而成,但是层析柱条件不同,是否要求盐浓度还要看层析柱,讨论不了。
6楼2011-08-21 21:08:05
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beiju(金币+1):谢谢参与
可以除盐
7楼2011-08-21 21:21:56
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zhen_fang

银虫 (正式写手)



beiju(金币+1):谢谢参与
楼上上复制粘贴了下嘛
8楼2011-08-22 21:56:39
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引用回帖:
8楼: Originally posted by zhen_fang at 2011-08-22 21:56:39:
楼上上复制粘贴了下嘛

你看看我以前回复的帖子,就知道我是自己打的还是复制的了,或者你百度一下看看哪个地方有我的这个帖子。
9楼2011-08-23 00:27:57
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beiju

铜虫 (初入文坛)


引用回帖:
5楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-08-21 21:02:33:
层析有多种,各自要求的样品条件不一样,有的对样品体积还有要求,所以不可一概而论,总结起来就是

离子交换层析柱:蛋白质样品要求低盐(绝对要透析除盐!)利于吸附,用离子强度来梯度解吸附,依照吸附力不同 ...

我上样之前没有用缓冲液透析 上的是亲和层析柱  以前透析过后上样 杂蛋白只有一个峰  这次出来两个连续的峰 之后洗脱后 又出来一个峰 求指教
10楼2011-08-23 09:27:44
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可惜我做野生酶纯化,不能用亲和层析
11楼2011-08-23 12:17:42
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here0009

银虫 (著名写手)



beiju(金币+1):谢谢参与
thank you
13楼2011-08-23 19:29:26
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简单回复
zhen_fang12楼
2011-08-23 17:18   回复  
qqaoqq14楼
2011-08-29 17:29   回复  
beiju(金币+1):谢谢参与
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