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wanghd2826

铁虫 (小有名气)

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虫号: 1316229
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专业: 森林生物学

[求助] 求高手指点RNA电泳图~~~~

第一次提RNA，用的是RNA iso plus，提取完后用普通1.2%的琼脂糖凝胶电泳跑的，电泳仪等用前均用DEPC水处理过，感觉过程中比较小心，但是结果还是不尽如人意，没有看到明显的18s 和28s，我是继续提纯呢，还是重提RNA呢，请各位提点意见~~谢谢

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1楼 2011-08-20 09:00:42

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linqin1029

新虫 (初入文坛)

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虫号: 1095143
注册: 2010-09-10
性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

根据你的图发现你提的RNA降解很严重，分析你的实验步骤发现需要改进，改进如下：
1、先在1.5ml离心管+RNAiso plus 1.ml +RNA酶抑制剂5ul +B-巯基乙醇10ul 混匀待用
2、虫体解剖+液氮研磨
3、研磨后转入1.5ml离心管充分混匀
3、室温静置5min，4度12000rpm离心5min
4、取上清进入新tube，加1/5体积的氯仿（200ul)，震荡混匀
5、室温静置5min，4度12000rpm离心5min
6、取上清进入tube，加入等体积异丙醇，混匀。
7、室温静置10min，4度12000rpm离心10min
8、弃上清，向沉淀中加入1ml 75%冰冻乙醇清洗沉淀，4度12000rpm 离心10min
9、干燥沉淀（干燥放在超菌工作台中进行）加入20ul DEPC水取5ul进行电泳（电泳150MA 15MIN)