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huaizhenkai新虫 (小有名气)
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[求助]
LPS致炎时的问题
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近来查文献，发现筛选抗炎活性时. in vitro, RAW, 提前给药，孵育一段时间，再给与lps刺激，然后提取rna, 进行PCR分析 in vivo, 也是提前给药，再给与lps. 想请教一下，如果提前给药，然后lps刺激，发现NF-kb 等被抑制， 那么同时给药或者先给与LPS 刺激，然后再给药，对于研究机理上有什么区别。 我现在做的一个药物，发现在小鼠急性炎症模型上（LPS刺激），发现提前6小时给药，也能抑制tnf-a, il-6等细胞因子的表达，但是从rna 水平，又没有太大的变化；体外实验，RAW,提前给药，再用LPS刺激，结果却在蛋白水平和RNA水平都受到抑制。 有没有人帮助解释一下，可能的作用机理 同时能不能设计体外实验来证明该化合物的作用时间（？？） 比如，方案一：提前给药，共孵育30分钟，然后换了培养液(是否需要换培养液？？？)，再加入lps 刺激； 方案二：同时给药 方案三：先给与LPS刺激30分钟，换培养液（是否能换培养液？？),再给药， 这三种方案对于试验结果的解释，有什么不同呢？ 感谢大虾指教，我只有化学背景，对分子生物一头雾水：（ |
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 细胞实验 |
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huaizhenkai
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5楼2011-08-22 12:19:37
【答案】应助回帖
★ ★ ★
adslye(金币+3): 感谢交流~祝顺利！ 2011-08-21 15:52:46
huaizhenkai(金币+2): 三者的具体机理区别没有说的特别清楚，但是还是有帮助的 2011-08-21 19:26:59
adslye(金币+3): 感谢交流~祝顺利！ 2011-08-21 15:52:46
huaizhenkai(金币+2): 三者的具体机理区别没有说的特别清楚，但是还是有帮助的 2011-08-21 19:26:59
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那当然不同啊。 提前给药，先拟制，再给LPS当然没有多大的效果啊（这相当于吃保健品）。 先LPS，炎症产生了，再给药物治疗，这就想到与临床上治疗。 同时给药，意义不大，说实话。 我也是做炎症痛，我主要是做动物实验，细胞实验导师不推荐做。 LPS导致炎症痛的机理就是通过增加NF kappa B的这个途径的。我最近也做了这么一篇文章。都在写了。 |
2楼2011-08-20 10:32:05
huaizhenkai
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3楼2011-08-21 19:28:36
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+8): 感谢参与 2011-08-22 12:39:03
lstt09nk(BioEPI+1): 2011-08-22 12:39:19
lstt09nk(金币+8): 感谢参与 2011-08-22 12:39:03
lstt09nk(BioEPI+1): 2011-08-22 12:39:19
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哦，那你要搞明白，加药是阻断哪个通路。我导师一般不赞同先给药，作为治疗的话，还是先给LPS后给药。 方案一：先给药的目的，可能是先将LPS引起的信号通路阻断，或者延持LPS导致的效果，分析时，大部分都用延迟了LPS引起的效果。为什么这么做，是因为药物需要一定的作用时间，要是药物不能通过细胞膜，那还是比较麻烦。、 方案二：建立在方案一上的，同时孵育，可能会出现多种结果,可能LPS的效果被阻断，也可能要过会才能阻断。结果就是为了解释药物的作用时间的。 方案三：先LPS，lps导致的免疫反应都产生了，再给药，目的是为了验证这个药物在治疗LPS导致的作用上有没有效果。 你要做的话，建议方案一三都要做，至于体内和体外实验出现的不一样，很正常。 |
4楼2011-08-22 08:29:00
