24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 488  |  回复: 4
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xjj5287

铁虫 (初入文坛)

[求助] 酶活性

自己用毕氏酵母表达的一个基因片段,通过培养,取样测出具有相关酶活性,但用FPLC 仪Purify后,酶活性消失了,请教这到底是哪出问题啦?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

LS说的在理!最大可能是你的酶不稳定,纯化后的缓冲液不合适,变性掉了
5楼2011-08-20 16:57:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 欢迎交流 2011-08-19 18:36:13
是不是可以这么理解,你的酶粗提液有活性,纯化后没有活性了?
你表达的酶是否为真核生物的,如果是的话工程菌株中是否也有该酶的活性?
所以先确定你是否表达出你的酶了
2楼2011-08-19 16:39:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

★ ★
西瓜(金币+2): Good 2011-08-19 18:36:23
你的FPLC纯化条件(包括层析柱、洗脱条件、预处理)破坏了酶的结构,先试一下别的层析柱或者别的纯化仪。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2011-08-19 17:52:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, MolEPI+1): very good 2011-08-20 09:44:00
1.如果是金属酶,纯化后没有了金属离子
2.酶活性本来就不高,纯化后被稀释了,所以测不到活性
3.纯化后浓缩了,但你的酶属于蛋白酶,自己把自己干掉了
4.你的酶不稳定,纯化后的缓冲液不合适,变性掉了
5.请确认你是否收获到了纯化后的酶
6.纯化温度太高,变性掉,这个还跟你的酶不稳定有关
7.仪器有滞后,收错管了
8.测活性的时候拿错收集管了
你说的太不详细了,我只能给你列一些可能是原因了
4楼2011-08-20 01:20:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 322求调剂 +4 我真的很想学习 2026-03-23 4/200 2026-03-27 13:51 by 杨杨杨紫
[考研] 求调剂 +6 林之夕 2026-03-24 6/300 2026-03-27 08:38 by hypershenger
[考研] 求调剂,一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +4 @taotao 2026-03-26 5/250 2026-03-27 08:10 by hypershenger
[考研] 284求调剂 +11 junqihahaha 2026-03-26 12/600 2026-03-27 04:37 by wxiongid
[考研] 304材料求调剂 +4 钟llll 2026-03-26 4/200 2026-03-27 03:42 by wxiongid
[考研] 333求调剂 +6 wfh030413@ 2026-03-23 6/300 2026-03-26 22:45 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿华理,数一英一285求A区调剂 +8 AZMK 2026-03-25 10/500 2026-03-26 22:37 by 学员8dgXkO
[考研] 321求调剂 +6 wasdssaa 2026-03-26 6/300 2026-03-26 20:57 by sanrepian
[考研] 327求调剂 +7 prayer13 2026-03-23 7/350 2026-03-26 20:48 by 不吃魚的貓
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-26 6/300 2026-03-26 18:03 by 邱gl
[考研] 环境专硕324分求调剂推荐 +5 轩小宁—— 2026-03-26 5/250 2026-03-26 12:05 by i_cooler
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 347求调剂 +4 L when 2026-03-25 4/200 2026-03-25 13:37 by cocolv
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 318求调剂 +5 plum李子 2026-03-21 8/400 2026-03-25 09:26 by aa331100
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-24 3/150 2026-03-24 21:31 by peike
[考研] 一志愿北化315 求调剂 +3 akrrain 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:35 by 了了了了。。
[考研] 277分求调剂,跨调材料 +3 考研调剂lxh 2026-03-24 3/150 2026-03-24 13:52 by JourneyLucky
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
信息提示
请填处理意见