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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶活性
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xjj5287

铁虫 (初入文坛)

[求助] 酶活性

自己用毕氏酵母表达的一个基因片段，通过培养，取样测出具有相关酶活性，但用FPLC 仪Purify后，酶活性消失了，请教这到底是哪出问题啦？
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【分子生物】EPI帖

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1楼 2011-08-19 13:52:40
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 欢迎交流 2011-08-19 18:36:13
是不是可以这么理解，你的酶粗提液有活性，纯化后没有活性了？
你表达的酶是否为真核生物的，如果是的话工程菌株中是否也有该酶的活性？
所以先确定你是否表达出你的酶了
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2楼2011-08-19 16:39:12
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★
西瓜(金币+2): Good 2011-08-19 18:36:23
你的FPLC纯化条件（包括层析柱、洗脱条件、预处理）破坏了酶的结构，先试一下别的层析柱或者别的纯化仪。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2011-08-19 17:52:03
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, MolEPI+1): very good 2011-08-20 09:44:00
1.如果是金属酶，纯化后没有了金属离子
2.酶活性本来就不高，纯化后被稀释了，所以测不到活性
3.纯化后浓缩了，但你的酶属于蛋白酶，自己把自己干掉了
4.你的酶不稳定，纯化后的缓冲液不合适，变性掉了
5.请确认你是否收获到了纯化后的酶
6.纯化温度太高，变性掉，这个还跟你的酶不稳定有关
7.仪器有滞后，收错管了
8.测活性的时候拿错收集管了
你说的太不详细了，我只能给你列一些可能是原因了
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4楼2011-08-20 01:20:42
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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

LS说的在理！最大可能是你的酶不稳定，纯化后的缓冲液不合适，变性掉了
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5楼2011-08-20 16:57:04
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