188559楼: Originally posted by lyqifeih at 2011-08-20 09:26:48
BSPCR 还是比较好做的，按照说明书就行。PCR产物不宜直接送出去测序，最好转到细菌中过表达下，然后挑斑，每个PCR产物只是挑20，摇菌，送2ml菌液测序，我天天帮人干这活。这样就可以了。做甲基化，还要做MSPCR。...

4653527楼: Originally posted by spiderboy at 2012-08-08 21:01:27
你好，我现在也在尝试做BSPCR。做好几天了，都么没有扩出片段来。
我用的试剂盒是EZ DNA Methylation-Gold™ Kit 和Epigentek。
基因组也是用试剂盒提出来的，质量还行。
引物是文献上面已用的引物。
但是 ...

4656181楼: Originally posted by lyqifeih at 2012-08-13 09:09:57
您好！ 你确定引物合成的时候 比对过！我以前也是这样，有的文献的引物不一定能用！ 做BSP 引物应该有两对， 一对是做甲基化化，另一对是没有甲基化的做参照!...

4656349楼: Originally posted by spiderboy at 2012-08-13 13:06:28
比对过了。序列没问题。现在扩出来了，多加点Mg2+才扩出来的。...

6楼: Originally posted by lyqifeih at 2011-08-19 14:55:53
我一般选择200~400bp，也有P整个CpG岛的，但是效果没有200~400bp好。因为U产生太多的话，DNA不稳定，建议200bp左右。你从组织中提的DNA，BSPCR之后，产量够测序用么？我BSPCR之后，一般还要过表达下，才够测序。

6楼: Originally posted by lyqifeih at 2011-08-19 14:55:53
我一般选择200~400bp，也有P整个CpG岛的，但是效果没有200~400bp好。因为U产生太多的话，DNA不稳定，建议200bp左右。你从组织中提的DNA，BSPCR之后，产量够测序用么？我BSPCR之后，一般还要过表达下，才够测序。