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yuehuashou

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE

昨天做SDS-PAGE，结果：marker的条带清晰，比上样孔稍宽，却没有出现样品条带，分离胶内出现了大面积弥散，且弥散边缘染色明显较深。跑胶的时候观察到各泳道溴酚蓝相连呈波浪状（每样品孔上样量不同，是否与此相关）。跑胶用的所有试剂都是一周前配的。求高手分析结果的原因。
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1楼 2011-08-18 09:52:07
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子曰包子好吃

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-08-18 11:05:18
yuehuashou(金币+2): 考虑了一下可能是样品放久了，蛋白酶降解了蛋白，今天新制了样品，正在跑，出结果后再联系，谢谢 2011-08-19 14:54:16
你用的是多大浓度的胶？？？你的marker没问题说明胶没问题，应该是你的样品处理不当，有蛋白沉淀，或者上样量太大，还有就是尽量没空上样量一致。
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2楼2011-08-18 10:31:33
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416114799

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
1949stone(金币+4): 鼓励 2011-08-18 11:05:34
你说marker有条带，但是既然比上样孔宽，说明也弥散了。如此分析，可能是胶不均匀，散的如此严重，我认为只有一种可能，那就是网孔压根没有成型，这个问题只能怪药品了，你说药品是刚配的，但不代表没问题。
丙烯酰胺30%的很重要，但是一般不会出问题，它是形成网孔的前体物质，在催化剂APS和TEMED催化下，会形成聚丙烯酰胺，根据不同的浓度，会形成不同网孔的胶。所以，APS与TEMED呢，也容易失效，APS要密封干燥保存，TEMED也最好分装，拿一小瓶出来用就行了。自己可以做个试验看看是否是药品问题，如果APS不行，会影响网孔的成形，如果是TEMED不行，会影响凝胶时间。
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做人做事要低调,默默践行心中的梦想.
3楼2011-08-18 10:53:28
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416114799

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

上样太多或者不纯（如2楼说的，有杂质，可以先离心取上清，一般要这个过程），只可能拖带，没听过会弥散的。我想不是这个原因。更可况你说Marker也有弥散现象（比上样孔稍宽）。
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做人做事要低调,默默践行心中的梦想.
4楼2011-08-18 10:56:18
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tony0628

木虫 (小有名气)

阿郎哥
原因很多的！胶做的不好；电极缓冲液出现问题；加样出现弥散；等等。自己多总结吧！
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法是万年宝，人是百年囊。人去法犹在，代代护朝纲！
5楼2011-08-18 16:53:17
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