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yuehuashou

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE

昨天做SDS-PAGE,结果:marker的条带清晰,比上样孔稍宽,却没有出现样品条带,分离胶内出现了大面积弥散,且弥散边缘染色明显较深。跑胶的时候观察到各泳道溴酚蓝相连呈波浪状(每样品孔上样量不同,是否与此相关)。跑胶用的所有试剂都是一周前配的。求高手分析结果的原因。
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tony0628

木虫 (小有名气)

阿郎哥

原因很多的!胶做的不好;电极缓冲液出现问题;加样出现弥散;等等。自己多总结吧!
法是万年宝,人是百年囊。人去法犹在,代代护朝纲!
5楼2011-08-18 16:53:17
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子曰包子好吃

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-08-18 11:05:18
yuehuashou(金币+2): 考虑了一下可能是样品放久了,蛋白酶降解了蛋白,今天新制了样品,正在跑,出结果后再联系,谢谢 2011-08-19 14:54:16
你用的是多大浓度的胶???你的marker没问题说明胶没问题,应该是你的样品处理不当,有蛋白沉淀,或者上样量太大,还有就是尽量没空上样量一致。
2楼2011-08-18 10:31:33
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416114799

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
1949stone(金币+4): 鼓励 2011-08-18 11:05:34
你说marker有条带,但是既然比上样孔宽,说明也弥散了。如此分析,可能是胶不均匀,散的如此严重,我认为只有一种可能,那就是网孔压根没有成型,这个问题只能怪药品了,你说药品是刚配的,但不代表没问题。
丙烯酰胺30%的很重要,但是一般不会出问题,它是形成网孔的前体物质,在催化剂APS和TEMED催化下,会形成聚丙烯酰胺,根据不同的浓度,会形成不同网孔的胶。所以,APS与TEMED呢,也容易失效,APS要密封干燥保存,TEMED也最好分装,拿一小瓶出来用就行了。自己可以做个试验看看是否是药品问题,如果APS不行,会影响网孔的成形,如果是TEMED不行,会影响凝胶时间。
做人做事要低调,默默践行心中的梦想.
3楼2011-08-18 10:53:28
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416114799

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

上样太多或者不纯(如2楼说的,有杂质,可以先离心取上清,一般要这个过程),只可能拖带,没听过会弥散的。我想不是这个原因。更可况你说Marker也有弥散现象(比上样孔稍宽)。
做人做事要低调,默默践行心中的梦想.
4楼2011-08-18 10:56:18
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