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海王之心2751

金虫 (小有名气)

[求助] 小分子多肽的分离纯化

前几天老板给我一个大海捞针的问题啊,我没做过不知道从哪里入手,具体是;把一个具有溶血栓的大分子多肽用酶切法分解成小分子多肽,找出有溶血栓活性小分子多肽,并分离纯化,做成注射剂。现在把大分子多的氨基酸系列排列好了,并找了几种没的切割为点,主要是不知道那段小分子有活性啊 ?有没有哪位高人做这方面的,指点指点小弟,谢谢!
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rongming

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

海王之心2751(金币+1): 酶切后会暴露出更多的底物结合位点 2011-10-21 15:58:01
即使大分子多肽具有溶血活性,但你酶解以后很可能根本找不到具有活性的小分子多肽。楼主如果大分子多肽有足够的量,还能分离纯化,可以把酶解以后的每个小肽用HPLC分离以后在检测溶血活性。另外大分子多肽是否有空间结构,酶解要先破坏空间结构
4楼2011-08-23 08:44:02
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖


zhychen2008(金币+1): 多谢回帖交流 2011-08-22 22:24:59
海王之心2751(金币+2): 谢谢你! 2011-10-01 08:24:30
可以考虑分段表达蛋白,然后测活,再逐步减少片段大小
2楼2011-08-16 21:51:08
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brighten

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


zhychen2008(金币+1): 感谢回帖交流 2011-08-22 22:25:17
海王之心2751(金币+5): 小分子容易吸收,特别是化妆品,如果分子量小于500,那很理想的! 2011-10-01 08:29:35
可能比较麻烦噢,首先要确定你大分子内有哪几个酶切位点or你所用酶的酶切位点,将大分子酶切后进行分离纯化,分别得到各段小分子,然后测活性确定活性片段。问题是如果你的大分子多肽有活性的话,为何要切为小分子呢?
3楼2011-08-22 15:43:07
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daisy212475

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


lk590(金币+1): 谢谢 2011-11-28 12:46:03
海王之心2751(金币+2): 2012-01-12 23:17:21
引用回帖:
1楼: Originally posted by 海王之心2751 at 2011-08-16 16:43:25:
前几天老板给我一个大海捞针的问题啊,我没做过不知道从哪里入手,具体是;把一个具有溶血栓的大分子多肽用酶切法分解成小分子多肽,找出有溶血栓活性小分子多肽,并分离纯化,做成注射剂。现在把大分子多的氨基酸 ...

一般反相色谱分离纯化,效果相对比较理想。
6楼2011-11-28 08:26:06
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