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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » WB检测磷酸化蛋白
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geek23

木虫 (小有名气)

[求助] WB检测磷酸化蛋白

各位大侠,有用过CST的磷酸化抗体检测磷酸化蛋白的吗?请问在整个提蛋白以及WB过程中有什么注意事项?小女最近做了几个抗体都没有条带.急~~~
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Bethechangeyouwishtosee.
1楼 2011-08-15 10:23:24
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alicezzh

新虫 (初入文坛)
1、磷酸化蛋白的Western尽量用当天提取没有冻融的，否则磷酸化状态易于遭到破坏，检测不出
2、 蛋白抽提、封闭均需加入磷酸酶抑制剂
3、封闭液不能用脱脂奶粉，应用BSA
4、洗涤用TBST
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37楼2013-07-17 18:19:21
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AZURESKY1999

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

也想做此类相关的课题，但并不是太懂，友情帮顶
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2楼2011-08-15 16:26:06
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qingyuansw20

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
adslye(金币+1): 鼓励交流~祝顺利！ 2011-08-15 17:49:33
geek23(金币+5): 请问楼上.我主要是做药物处理后一些蛋白的表达,我一般是加药后48H提蛋白.你的意思是说缩短时间间隔吗?谢谢你的回答. 2011-08-16 16:49:42
CST的抗体应该不错，但不知你的是单克隆还是多克隆，没有条带，是不是磷酸化没有形成。磷酸化有时形成的时间比较短，做实验时要严格对待。
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3楼2011-08-15 16:48:37
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geek23

木虫 (小有名气)
请问楼上.我主要是做药物处理后一些蛋白的表达,我一般是加药后48H提蛋白.你的意思是说缩短时间间隔吗?谢谢你的回答.
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Bethechangeyouwishtosee.
4楼2011-08-16 16:49:04
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