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geek23

木虫 (小有名气)

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[求助] WB检测磷酸化蛋白

各位大侠,有用过CST的磷酸化抗体检测磷酸化蛋白的吗?请问在整个提蛋白以及WB过程中有什么注意事项?小女最近做了几个抗体都没有条带.急~~~

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Bethechangeyouwishtosee.

1楼 2011-08-15 10:23:24

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noah1020

新虫 (小有名气)

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专业: 细胞信号转导

【答案】应助回帖

★ ★
silicare(金币+2, BioEPI+1): 谢谢参与 2011-08-19 15:13:52

我用CST抗体做过p-erk~很好用的抗体~我用的药物刺激后peak出现在5min~你要真给药48h估计悬了...还是缩短暴露时间试试吧~还有就是，抗体可以在-20存，蛋白必须在-80，尤其是磷酸化的！在转膜的时候在转膜槽外面加一个盆，放满冰，让转膜槽处于冰浴的状态~你提取蛋白的方法是什么？提取要是不注意的话，磷酸化蛋白很脆弱，会讲解的~我当时提取的时候用的是Roche公司的提取试剂盒，比较可靠~WB就是这样，如果你的蛋白很稳定很给力，拿做起来就会相当顺手；如果蛋白不是很牢靠的话，就会比较麻烦了~