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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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madengyu

禁虫 (小有名气)
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1楼 2011-08-15 09:27:45
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sxxuan

金虫 (著名写手)
我一般是在PCR产物中直接加几个体系用量的dNTP和普通taq酶，然后72摄氏度1h，再做个产物纯化就好了。虽然效率没有很高，但一般都能做出来
楼主加A后的图都不错啦，做个PCR产物纯化之后就可以连接了，祝顺利
赞一下 回复此楼
你的日子如何，你的力量也必如何！
13楼2011-08-31 09:25:14
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madengyu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
2楼2011-08-15 09:29:08
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w2boluo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
1949stone(金币+3): 是滴 2011-08-15 11:19:04
madengyu(金币+2): 2011-08-15 12:06:37
高保真酶的反应做到特异性这么好已经难能可贵了。任何时候只要电泳看的见都应该可以连上。可以不必浓缩直接做下一步的。
说明书有的时候害人，不必每一步都切胶纯化的，切一次胶达到上述图片效果就行了，除去加A用的taq酶和dATP之类用pcr产物纯化试剂盒就可以了。
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How about the future？
3楼2011-08-15 09:43:12
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friya0910

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励！ 2011-08-15 13:24:28
引用回帖:
1楼: Originally posted by madengyu at 2011-08-15 09:27:45:
大家好！麻烦大家帮我解决一下问题。
      我PCR用的是高保真酶，不能直接克隆T载体，又进行了加A反应。加A说明书上要求，PCR产物先切胶纯化。所以我在加A之前跑了PCR产物的电泳（见电泳图片），进行了切胶纯化 ...

我觉得你这切胶回收的效果做TA克隆应该是没问题的！祝好运！
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4楼2011-08-15 09:51:24
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