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muchong5577

金虫 (正式写手)

[求助] 做RT-PCR的战友们,内标定量怎么做?

从来没做过内标定量的荧光定量PCR,有战友做过这个没?内标定量有什么优点?具体怎么做?初次接触,望大家帮我解答这些疑问。告诉我这方面的文献资料也行。谢谢了!
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silicare

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优秀版主

引用回帖:
10楼: Originally posted by adslye at 2011-08-10 14:05:31:
绝对定量扩增效率不需要考虑吧。因为在P标准品和样品的时候,引物是一样的。

影响扩增效率的可不仅仅是引物,基本相同酶体系,模板的干扰物仍然很重要,P基因组和P质粒是完全不同的难度
11楼2011-08-10 16:29:19
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muchong5577

金虫 (正式写手)

期待高手的帮助
2楼2011-08-09 16:09:59
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adslye

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
muchong5577(金币+5): 非常感谢! 2011-08-10 09:42:41
lstt09nk(金币+5, BioEPI+1): 我也要做这个,感谢分享~~ 2011-08-11 13:06:15
1.内标定量?是指的内参吧?reference gene ?是这个吗?
2.real-time 定量有三种:标准曲线法,双标准曲线法,DELTA DELTA CT法。(PS.没有楼主说的内标定量法)
   标准曲线法:是精确定量,知道具体的表达数,一般应用于医院检测病毒携带数(乙肝病毒数)。
   后面两者是相对定量,知道A和B之间的关系,比如:A是B的多少倍。用于处理组和非处理组之间的基因表达差异。
一般认为绝对定量可以不用内参,相对定量使用内参。
3.具体操作过程。个人感觉楼主初次接触,还是看些资料吧。
生物秀这个栏目还可以http://ask.bbioo.com/special/experiment/RealtimePCR.htm
推荐这本书《Real-time PCR》  网上有下,我就不上传了。
3楼2011-08-09 16:39:41
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missoulmate

金虫 (小有名气)

RT-PCR 是反转录PCR
楼主说的应该是RealTime-PCR吧
根据内参和你做的引物得到一个标曲,然后再做后面的。
4楼2011-08-09 22:57:43
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