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snmrna铁杆木虫 (著名写手)
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请教下筛选程序问题（HPLC）
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我有很多菌（主要是放线菌）的发酵液（>1000），需要用HPLC来分析哪些产大环内酯类物质（阳性率在10%以下）。目前了解到可以通过混合十个样品的发酵液来检测，阴性则检测完毕，阳性则选五个来混合继续测定，如此筛选下去。。。 我算得的一个样筛选次数期望在0.335-0.37，我想肯定有最好的方案，请各位前辈指教下！感激不尽 |
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【答案】应助回帖
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snmrna(金币+15): 2011-09-22 17:54:11
snmrna(金币+15): 2011-09-22 17:54:11
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有时候你的菌产大环内脂类抗生素，但是单位很低，这在没有进行发酵优化的情况下是很常见的，直接混合进样有可能会造成漏检。 我给你的意见是用固相萃取技术，最好用C18或者聚苯乙烯树脂的SPE柱对发酵液进行浓缩处理，因为大环内酯类抗生素都有一定的亲脂性，在这类SPE柱上能够很好的吸附。发酵液上SPE柱之后水洗，然后用甲醇或乙醇洗脱下来。在上HPLC之前我还建议你用生物活性法测定下。把洗脱液点在纸片上，挥发掉溶剂之后贴在枯草芽孢杆菌的琼脂板上，因为大环内酯类抗生素对革兰氏阳性菌有抑制性。琼脂板37度培养12小时后如果有抑菌圈，证明其可能有产物，如果没有抑菌圈，其有产物的可能性基本没有。然后将有活性的洗脱液做HPLC，经过浓缩HPLC上的峰应该能很清楚的看出来，如果你们又DAD检测器什么的应该能很好的进行确定了。 |
5楼2011-09-18 15:31:53
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