CyRhmU.jpeg
查看: 1767  |  回复: 16

longage.gene

银虫 (小有名气)


1949stone(金币+1): 详细说说 2011-08-04 18:55:30
设计的大约10个引物一个都没扩增出来------你怎么判断?!
切记,cycle别多,你7k的话,7cycle就够了。这样pcr产物跑电泳有可能看不到的!当然能看到最好。我一般50ulpcr体系,跑电泳10ul。
11楼2011-08-04 17:45:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by c3024034 at 2011-08-03 15:21:46:
我是质粒上的突变,用什么设计引物好啊?

你的意思是用什么软件来设计引物?primer5就可以
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
12楼2011-08-04 19:02:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longage.gene

银虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 空谷幽风 at 2011-08-04 19:02:20:
你的意思是用什么软件来设计引物?primer5就可以

楼主他想定点突变的话,引物基本没得选。 有时要突变的附近序列不好p也没办法。我的经验是质粒突变的话,没那么复杂。
13楼2011-08-05 10:59:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

quiller2000

木虫 (著名写手)

不知道你做出来没有,我们做过很多,就是用质粒做的,好像挺容易的;可以给你试试,反正现在也没有什么事情
致良知
14楼2011-08-05 15:23:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
15楼2012-04-30 16:09:11
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

艰苦温度

新虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by longage.gene at 2011-08-04 17:45:46
设计的大约10个引物一个都没扩增出来------你怎么判断?!
切记,cycle别多,你7k的话,7cycle就够了。这样pcr产物跑电泳有可能看不到的!当然能看到最好。我一般50ulpcr体系,跑电泳10ul。

7个循环感觉希望渺茫啊。
问个细节问题,我最近也在做定点突变,50ul体系,模板加入20ng,7kb质粒,延伸时间7min,终延伸7min,25个循环和30个循环都没有产物,电泳检测用了5ul。
请问哪里出问题了?循环太多了吗?拜谢!
16楼2014-06-06 23:55:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longage.gene

银虫 (小有名气)

2年没做这方面的实验了,记得不是很清楚。我看了下我自己之前的留言,意思应该是不要太多cycle,多了可能不好,为什么不好,我不记得了,但是我当时这样说的话肯定是有原因的。你可以先尝试少cycle试试,仔细看你的酶的说明书。
17楼2014-06-11 15:28:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 c3024034 的主题更新
信息提示
请填处理意见