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zouxy铜虫 (小有名气)
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[求助]
蛋白质固定吸附与蛋白质分离纯化的区别
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| 请问 蛋白质固定吸附与蛋白质分离纯化的区别是什么？有没有相关的资料给传一份呀？或者给深入 的讲解一下吧！非常感谢！ |
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jinkui960
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+8, BioEPI+1): 很好~ 2011-08-03 13:42:26
silicare(金币+8, BioEPI+1): 很好~ 2011-08-03 13:42:26
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蛋白质固定吸附是蛋白质分离纯化的一种方式，蛋白的分离纯化方法很多。 蛋白的分离纯化主要利用不同蛋白间内在的相似性与差异，利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染，而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异，利用这些差异可将蛋白从混合物中分离出来。 常用的蛋白分离纯化方法包括：分子筛（蛋白分子量大小差异），离子交换柱和疏水柱（蛋白的带电性质差异）和亲和层析等。下面简单的解释一下这些方法的原理。 1） 离子交换色谱是基于蛋白与离子交换树脂间的相互电荷作用，通过选择不同的缓冲液，同一种蛋白既可以和阴离子交换树脂（能结合带负电荷的分子）结合，也可以和阳离子交换树脂结合。 这是在所有的蛋白纯化与浓缩方法中最有效方法。 2）亲和层析是基于目的蛋白与固相化的配基特异结合而滞留，其他杂蛋白会流过柱子。你提到的蛋白质固定吸附也属于这一种。 3）疏水作用 层析蛋白是由疏水性和亲水性氨基酸组成的。疏水性氨基酸位于蛋白空间结构的中心部位，远离表面的水分子。亲水性氨基酸残基则位于蛋白表面。不同的蛋白疏水性不同，与疏水作用力大小也不同，通过逐渐降低缓冲液中盐浓度冲洗柱子，在盐浓度很低时，蛋白恢复自然状态，疏水作用力减弱被洗脱出来。 4）排阻层析 也叫凝胶过滤或分子筛。排阻层析柱的填充颗粒是多孔的介质，柱中围绕着颗粒所能容纳的液体量叫流动相，也称无效体积。太大的蛋白不能进入颗粒的孔内，只能存在于无效体积的溶液中，将会最早从柱中洗脱出来，对这部分蛋白无纯化效果。由于各种蛋白的分子大小不同，扩散进入特定大小孔径颗粒内的能力也各异。大的蛋白分子会被先洗脱出来，分子越小，洗脱出来的越晚。 希望对你有帮助！ |
7楼2011-08-03 12:53:55
jinkui960
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9楼2011-08-04 14:26:38