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imfly77

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
adslye(金币+10): 感谢您认真的应助，非常专业，可否整理到一起我可以准备发EPI。祝顺利~ 2011-08-03 13:23:32
silicare(BioEPI+1): 2011-08-03 14:15:56
zouxy(金币+8): 感谢 2011-08-10 11:41:35

在基本原理上，固定吸附和基于固定吸附的分离纯化（以离子色谱和亲和色谱为例）都是通过蛋白质与基质的相互作用（电荷作用、配位作用等等）实现蛋白质与基质的结合。
不同的地方在于，固定吸附的着眼点是如何在不损害蛋白质活性的前提下尽可能强的将蛋白质固定在基质上；而分离纯化的着眼点则在于如何利用不同蛋白质对基质结合强度的差别，实现不同蛋白质组分的可逆分离，在于吸附和释放。
以PHB（聚羟基丁酸酯）的应用为例，最早人们发现Phasin蛋白能够吸附在PHB上，所以开发了直接利用PHB一步法固定化“Phasin-模式蛋白”融合蛋白的固定化方法，另一组人则利用这种固定化方法，进一步在"Phasin-模式蛋白"之间加入内含肽intein，通过诱导intein的断裂实现模式蛋白的释放从而达到纯化的目的。这个例子其实就能够很好的体现固定吸附和基于固定吸附的蛋白质纯化之间的关系。

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2楼2011-08-01 14:30:45

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+8, BioEPI+1): 很好~ 2011-08-03 13:42:26

引用回帖:

1楼: Originally posted by zouxy at 2011-08-01 11:01:52:
请问蛋白质固定吸附与蛋白质分离纯化的区别是什么？有没有相关的资料给传一份呀？或者给深入的讲解一下吧！非常感谢！

蛋白质固定吸附是蛋白质分离纯化的一种方式，蛋白的分离纯化方法很多。

蛋白的分离纯化主要利用不同蛋白间内在的相似性与差异，利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染，而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异，利用这些差异可将蛋白从混合物中分离出来。

常用的蛋白分离纯化方法包括：分子筛（蛋白分子量大小差异），离子交换柱和疏水柱（蛋白的带电性质差异）和亲和层析等。下面简单的解释一下这些方法的原理。

1）离子交换色谱是基于蛋白与离子交换树脂间的相互电荷作用，通过选择不同的缓冲液，同一种蛋白既可以和阴离子交换树脂（能结合带负电荷的分子）结合，也可以和阳离子交换树脂结合。这是在所有的蛋白纯化与浓缩方法中最有效方法。
2）亲和层析是基于目的蛋白与固相化的配基特异结合而滞留，其他杂蛋白会流过柱子。你提到的蛋白质固定吸附也属于这一种。
3）疏水作用层析蛋白是由疏水性和亲水性氨基酸组成的。疏水性氨基酸位于蛋白空间结构的中心部位，远离表面的水分子。亲水性氨基酸残基则位于蛋白表面。不同的蛋白疏水性不同，与疏水作用力大小也不同，通过逐渐降低缓冲液中盐浓度冲洗柱子，在盐浓度很低时，蛋白恢复自然状态，疏水作用力减弱被洗脱出来。
4）排阻层析也叫凝胶过滤或分子筛。排阻层析柱的填充颗粒是多孔的介质，柱中围绕着颗粒所能容纳的液体量叫流动相，也称无效体积。太大的蛋白不能进入颗粒的孔内，只能存在于无效体积的溶液中，将会最早从柱中洗脱出来，对这部分蛋白无纯化效果。由于各种蛋白的分子大小不同，扩散进入特定大小孔径颗粒内的能力也各异。大的蛋白分子会被先洗脱出来，分子越小，洗脱出来的越晚。

希望对你有帮助！

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7楼2011-08-03 12:53:55

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