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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 谁做过pEASY-Blunt Cloning啊？谁做过平末端连接啊？
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lingxingcao

新虫 (小有名气)

[求助] 谁做过pEASY-Blunt Cloning啊？谁做过平末端连接啊？

我用phusion酶PCR扩增出了我的产物，下一步是做连接，可是我不知道该怎么做。说明书看不懂啊？
克隆反应体系的建立
在微型离心管中依次加入溶液：
PCR 产物 0.5-4 μl
（根据PCR 产物量可适当增减，最多不超过4 μl）
pEASY- Blunt Cloning Vector 1 μl
轻轻混合，室温 (20℃-37℃) 反应5分钟。反应结束后，
将离心管置于冰上。
是这样做就可以了吗？怎么没加连接酶啊？
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1楼 2011-07-23 17:35:32
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3232mww

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 潘贤辉· at 2016-10-29 22:47:25
最近在做原核表达载体构建，我的目的片段大小为3.5kb和4.5kb，用的表达载体是全式金的pEASY-Blunt E2，感受态是E.coli DH5a，链接表达载体的体系是pcr产物3ul，ddH2O,1ul，pEASY-Blunt E2加1ul，总共5ul，室温30min ...

你的做出来了吗？我的做了几次，平板也是干干净净
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8楼2016-12-16 17:06:41
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