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lingxingcao

新虫 (小有名气)

[求助] 谁做过pEASY-Blunt Cloning啊?谁做过平末端连接啊?

我用phusion酶PCR扩增出了我的产物,下一步是做连接,可是我不知道该怎么做。说明书看不懂啊?
克隆反应体系的建立
在微型离心管中依次加入溶液:
PCR 产物 0.5-4 μl
(根据PCR 产物量可适当增减,最多不超过4 μl)
pEASY- Blunt Cloning Vector 1 μl
轻轻混合,室温 (20℃-37℃) 反应5分钟。反应结束后,
将离心管置于冰上。

是这样做就可以了吗?怎么没加连接酶啊?
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3232mww

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 潘贤辉· at 2016-10-29 22:47:25
最近在做原核表达载体构建,我的目的片段大小为3.5kb和4.5kb,用的表达载体是全式金的pEASY-Blunt E2,感受态是E.coli DH5a,链接表达载体的体系是pcr产物3ul,ddH2O,1ul,pEASY-Blunt E2加1ul,总共5ul,室温30min ...

你的做出来了吗?我的做了几次,平板也是干干净净
8楼2016-12-16 17:06:41
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